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[!--downpath--]倒置螢光顯微鏡
儀器操作手冊(cè)
倒置螢光顯微鏡
儀器機(jī)型：LeicaDMiL
放置地點(diǎn)：南開(kāi)學(xué)院紅橋?qū)W校綜合實(shí)驗(yàn)樓D317
生物影像學(xué)平臺(tái)
管理員：肖楠楠，張妍（）
預(yù)約形式：填寫(xiě)公告板處紙質(zhì)預(yù)約表
計(jì)費(fèi)形式：免費(fèi)開(kāi)放
配置
※空氣鏡鏡頭5倍，10倍，20倍，40倍；
※熒光濾塊：DAPI（EX：360/40，DC：400徠卡倒置熒光顯微鏡，EM:425）；
※GFP（EX：470/40，DC：495，EM:525/50）；
※RFP（EX：538/46，DC：580，EM:590）；
※相機(jī)：彩色CCD（化學(xué)象素≥2560×1920），可進(jìn)行原色成像。
開(kāi)機(jī)
依次打開(kāi)鹵素?zé)艄庠础@微鏡機(jī)身電源→電腦主機(jī)電源→拍攝軟件“LASV4.8”。
上樣
01
打算樣品，放置于載物臺(tái)上對(duì)準(zhǔn)目鏡（需自動(dòng)調(diào)節(jié)位置）。
02
選擇鏡頭：該顯微鏡配有5×，10×，20×，40×（使用前需聯(lián)系管理員），自動(dòng)旋轉(zhuǎn)鏡頭到位。
03
使用白光硬度旋鈕，調(diào)節(jié)照明色溫。
04
先調(diào)節(jié)物鏡的瞳距，觀察的同時(shí)調(diào)節(jié)鏡頭距離，找到焦面。
如圖所示，內(nèi)圈為粗準(zhǔn)焦螺旋（左圖），外圈為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋（下圖）；順秒針調(diào)節(jié)鏡頭上升，逆秒針調(diào)節(jié)鏡頭增長(zhǎng)。
05
切換白光觀察模式：將遮擋板拉至第二檔是普通明場(chǎng)（BF）觀察（左圖），可將光源適度下調(diào)；其余三檔分別代表5×，10×/20×，40×鏡頭對(duì)應(yīng)的相差（PH）觀察模式。
06
切換螢光觀察模式：打開(kāi)螢光至“open”狀態(tài)，黃燈亮，確認(rèn)（順秒針旋轉(zhuǎn)）至指向最大照度，調(diào)節(jié)白光光源硬度旋鈕關(guān)掉白光（參考步驟3）。
07
調(diào)節(jié)濾塊位置，如右圖，濾塊推至最右邊代表GFP紅色螢光濾塊，推至中間位置代表DAPI紅色螢光濾塊（白光下明場(chǎng)觀察須要將濾塊放置于此），推至最右邊代表RFP藍(lán)色螢光濾塊。
08
確定好位置和焦面后轉(zhuǎn)換到筆記本拍攝模式，拉桿掉入為【顯微鏡物鏡/肉眼】觀察（左圖），將拉桿拉出為【電腦CCD/軟件】觀察（下圖）。
測(cè)樣
01
軟件界面，依次點(diǎn)擊“采集”—“Mic1”，選擇當(dāng)前樣品使用的鏡頭和螢光濾塊。
02
點(diǎn)擊“攝像頭”，打開(kāi)“圖像模式”選項(xiàng)徠卡倒置熒光顯微鏡，如需原色或螢光成像在“圖像種類(lèi)”中選擇“彩色”；如需黑白或灰度成像則選擇“灰度”。
03
預(yù)覽狀態(tài)下微調(diào)焦面呈現(xiàn)最清晰狀態(tài)，按照樣品情況，分別調(diào)節(jié)“曝光”，“增益”和“飽和度”以達(dá)到最佳圖象療效（“伽瑪值”默認(rèn)為1.0）。
04
選擇保存路徑，在”D”盤(pán)“DATA“目錄下新建存儲(chǔ)文件夾，點(diǎn)擊“瀏覽”，選擇相應(yīng)的文件夾存儲(chǔ)數(shù)據(jù)，在“圖像數(shù)據(jù)”中更改文件名稱(chēng)和備注。
05
點(diǎn)擊左下角“采集”拍攝圖象。
06
加標(biāo)尺處理，點(diǎn)擊“處理”，點(diǎn)擊右上角加標(biāo)尺符號(hào)，點(diǎn)擊“顯示”，更改標(biāo)尺信息即可。
07
拍攝完成后將數(shù)據(jù)打包上傳或拷貝，數(shù)據(jù)儲(chǔ)存時(shí)間一年。
死機(jī)
關(guān)掉軟件→關(guān)閉筆記本→關(guān)閉顯微鏡光源→鹵素?zé)艄庠矗ㄆ鸫a運(yùn)行30min后才可關(guān)掉），將樣品取下，清除載物臺(tái)和桌面，做好登記。
藥化生國(guó)重小型儀器平臺(tái)