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[!--downpath--]倒置螢光顯微鏡
儀器操作手冊
倒置螢光顯微鏡
儀器機型：LeicaDMiL
放置地點：南開學院紅橋學校綜合實驗樓D317
生物影像學平臺
管理員：肖楠楠，張妍（）
預約形式：填寫公告板處紙質預約表
計費形式：免費開放
配置
※空氣鏡鏡頭5倍，10倍，20倍，40倍；
※熒光濾塊：DAPI（EX：360/40，DC：400徠卡倒置熒光顯微鏡，EM:425）；
※GFP（EX：470/40，DC：495，EM:525/50）；
※RFP（EX：538/46，DC：580，EM:590）；
※相機：彩色CCD（化學象素≥2560×1920），可進行原色成像。
開機
依次打開鹵素燈光源→顯微鏡機身電源→電腦主機電源→拍攝軟件“LASV4.8”。
上樣
01
打算樣品，放置于載物臺上對準目鏡（需自動調節位置）。
02
選擇鏡頭：該顯微鏡配有5×，10×，20×，40×（使用前需聯系管理員），自動旋轉鏡頭到位。
03
使用白光硬度旋鈕，調節照明色溫。
04
先調節物鏡的瞳距，觀察的同時調節鏡頭距離，找到焦面。
如圖所示，內圈為粗準焦螺旋（左圖），外圈為細準焦螺旋（下圖）；順秒針調節鏡頭上升，逆秒針調節鏡頭增長。
05
切換白光觀察模式：將遮擋板拉至第二檔是普通明場（BF）觀察（左圖），可將光源適度下調；其余三檔分別代表5×，10×/20×，40×鏡頭對應的相差（PH）觀察模式。
06
切換螢光觀察模式：打開螢光至“open”狀態，黃燈亮，確認（順秒針旋轉）至指向最大照度，調節白光光源硬度旋鈕關掉白光（參考步驟3）。
07
調節濾塊位置，如右圖，濾塊推至最右邊代表GFP紅色螢光濾塊，推至中間位置代表DAPI紅色螢光濾塊（白光下明場觀察須要將濾塊放置于此），推至最右邊代表RFP藍色螢光濾塊。
08
確定好位置和焦面后轉換到筆記本拍攝模式，拉桿掉入為【顯微鏡物鏡/肉眼】觀察（左圖），將拉桿拉出為【電腦CCD/軟件】觀察（下圖）。
測樣
01
軟件界面，依次點擊“采集”—“Mic1”，選擇當前樣品使用的鏡頭和螢光濾塊。
02
點擊“攝像頭”，打開“圖像模式”選項徠卡倒置熒光顯微鏡，如需原色或螢光成像在“圖像種類”中選擇“彩色”；如需黑白或灰度成像則選擇“灰度”。
03
預覽狀態下微調焦面呈現最清晰狀態，按照樣品情況，分別調節“曝光”，“增益”和“飽和度”以達到最佳圖象療效（“伽瑪值”默認為1.0）。
04
選擇保存路徑，在”D”盤“DATA“目錄下新建存儲文件夾，點擊“瀏覽”，選擇相應的文件夾存儲數據，在“圖像數據”中更改文件名稱和備注。
05
點擊左下角“采集”拍攝圖象。
06
加標尺處理，點擊“處理”，點擊右上角加標尺符號，點擊“顯示”，更改標尺信息即可。
07
拍攝完成后將數據打包上傳或拷貝，數據儲存時間一年。
死機
關掉軟件→關閉筆記本→關閉顯微鏡光源→鹵素燈光源（起碼運行30min后才可關掉），將樣品取下，清除載物臺和桌面，做好登記。
藥化生國重小型儀器平臺
