在心血管研究中，人們常使用急性分離的心肌細胞做膜片鉗或激光共聚焦實驗，做上述實驗時，須要細胞的數(shù)目不多，但要求細胞“耐鈣”（不跳動）。怎樣在分離時每次都能得到“耐鈣”的心肌細胞，已成為人們的關(guān)注熱點。
實際上細胞膜片，影響心肌細胞分離療效的誘因好多，比如:(1)摘取腎臟到主動脈導尿迅速的時間，通常要求在2min以內(nèi)，時間過長可發(fā)生心肌缺血-再灌注損傷；（2）主動脈存留過短常造成導尿穿過主動脈瓣而插入心室，過長會造成灌流液經(jīng)主動脈分支流出，均可影響灌流療效；（3）Langendoff裝置事先要排盡氣泡，否則氣栓可引起心肌損傷；（4）注意調(diào)節(jié)灌流液的酸堿度，偏酸偏堿均可導致心肌損傷等。
一般采用離體灌流裝置分離心肌細胞。首先用正常含鈣液預灌注10-20min（沖殘血,還氧債）→無鈣液灌注5min（解除心肌細胞間的橋粒和聯(lián)接）→Ⅱ型或Ⅰ型膠原酶循環(huán)灌注（解離細胞間結(jié)締組織）。因為稱取酶量、生產(chǎn)公司和批號不同還會影響消化的時間和療效，所以各個研究小組報導膠原酶的消化時間也各不相同。通常當灌流液出現(xiàn)拉絲,腎臟坐果酥脆、顏色發(fā)白時停止膠原酶消化。
上述分離方式和注意事項可參見：
（1）張紫冠,李衛(wèi)華,黃崢嶸等。SD小鼠心肌細胞分離方式探求。心血管復健醫(yī)學刊物2010，19（3）：274-278
（2）廖華，糜濤，涂志業(yè)等。成年家兔心肌細胞分離方式的改良。中國組織工程研究與臨床復健第13卷第33期2009；13（33）：6536-6539
（上述2篇論文可以從我的文獻中“參考文獻”類別中免費全文下載）
傳統(tǒng)的心肌細胞分離方式常采用固定的消化時間，結(jié)果往往是“有時歡樂有時愁”。臺灣學院的李貴榮院長倡導的“分段消化法”是分離心肌細胞“屢試不爽”的好方式。
前幾天，翻閱往日的相片時，無意中聽到了我們和李貴榮院士的一些相片，它喚起了我們一段美好的追憶：
1989-1990,我獲得了世界衛(wèi)生組織（WHO）的獎學金，在全蘇腎臟病研究中心（俄羅斯）學習膜片鉗技術(shù)。楊寶峰教授陸續(xù)在臺灣筑波Eisai研究所（1991-1992）和美國舊金山腎臟病研究所（1995-1996）讀博士后。李玉榮院士也曾在全蘇腎病研究所（1991-1992）做訪問學者。為了在西安醫(yī)科學院舉辦膜片鉗研究，當時均為教研室副部長和副院長的我們兩人，即楊寶峰（毒理）、李玉榮（生理）徐長慶（病理生理），回國后自發(fā)組合成聯(lián)合攻關(guān)小組。共同的理想，共同的信念，共同的戰(zhàn)斗，使我們成為了休戚與共的好同事，堪稱哈醫(yī)大鐵三角。
聯(lián)合攻關(guān)小組（楊寶峰，李玉榮，徐長慶）在研討膜片鉗實驗
1997.6.20–23，為了促進膜片鉗技術(shù)在全省的推廣，哈醫(yī)大舉行了《膜片鉗理論和實驗學習班》。聘請當時美國舊金山腎臟研究所的李貴榮研究員為主講人，楊寶峰院士、李玉榮院士和我作為副講人，并向?qū)W員領(lǐng)取了由我們兩人編撰學習班課件。
學習班全體合照
大會結(jié)束時，我們還坐船游玩了美麗的松花江，并在蘆葦叢中合照留影。
哈爾濱浦口合照（楊寶峰，李貴榮，李玉榮，徐長慶）
在此次大會上，李貴榮院長向我們介紹了分離心肌細胞的“分段消化法”。
所謂的“分段消化法”和傳統(tǒng)的心肌細胞分離方式?jīng)]有本質(zhì)的不同，只是同一個腎臟施行膠原酶的消化時間不同。首先以灌流液拉絲,、心臟酥脆、顏色發(fā)白確定一個平均消化時間（比如，30min）后，每次施行心肌細胞分離時，在這一時間點前后幾個時間點（比如20、25、30、35、40等）分別剪去少許心肌（通常由心底漸漸移至心尖），倒入KB液中吹打，鏡下觀察。在這種時間點中，總會有1個或多個時間點的消化時間合適細胞膜片，確保每次都能獲得滿意的分離療效，堪稱“事半功倍”或“以一當十”。
從此次學術(shù)大會后，我們成為了好同學，多次相互訪問。
訪問臺灣學院時合照
海峽兩岸心血管研討會合照（云南）
“分段消化”分離心肌細胞的方式在本課題組的實踐中時常奏效，因而，我樂意將它奉獻給舉辦心肌細胞分離的同學，希望也能助你們一臂之力。
上一篇：英語是騰飛的翅膀-我對玄孫兩人之爭的管見