2022年6月2日,復旦學院團隊在Cell在線發(fā)表文章[1],報導了四次跨膜蛋白4()可以介導膜上大創(chuàng)口的修補。研究者發(fā)覺在細胞膜遭到激光、去污劑、細胞焦亡和自然殺傷細胞造成的損傷后,會迅速的在損傷處富集,在膜上形成名為TEM()的功能性結(jié)構(gòu)單元,然后進一步組裝產(chǎn)生微米級宏結(jié)構(gòu)域,限制膜損傷的擴張以后對膜損傷進行修補,借以維持細胞在膜損傷后的正常生理功能。
另外,異常抒發(fā)的膜蛋白也常被用做抗生素靶向,但是在膜蛋白研究中,最難的莫過分膜蛋白的抒發(fā)和純化,如:
●膜蛋白大多難溶于水,在制備過程中須要脂類或去垢劑包裹
●在外源抒發(fā)過程中容易損傷細胞,導致抒發(fā)量低
●在純化時因為糖類存在細胞膜蛋白,蛋白會有損失,回產(chǎn)率低
●蛋白與膜分離后,氫鍵難維持易集聚失活
假如你也在膜蛋白制備中苦苦掙扎沒有出路,丁香園將聯(lián)合義翹為你們帶來「多次跨膜蛋白的制備策略及案例分享」主題直播細胞膜蛋白,除了詳盡講解膜蛋白研究進展與技術重難點,就會從實際案例中分享膜蛋白開發(fā)研究策略,幫助你清掃膜蛋白研究中的障礙!
這么直播開始前,我們先來對膜蛋白純化可能碰到的問題怎樣解決一睹為快吧~
膜蛋白不抒發(fā)或則抒發(fā)量低
可以選擇對目的片斷重新建立,進行密碼子優(yōu)化或改變抒發(fā)寄主,也可以添加促溶標簽或輔助蛋白。
蛋白構(gòu)型不穩(wěn)定且易集聚
添加輔助蛋白來確保構(gòu)型正確,對個別可能導致集聚結(jié)構(gòu)域進行截短或突變,調(diào)整蛋白緩沖液,添加還原劑或置換不同的去垢劑。
去垢劑千千萬不會選
去垢劑大約分為非離子型、離子型和兼性離子型,非離子型以X-100和DDM為代表,通常比較溫和,不易造成蛋白質(zhì)變性;離子型以SDS為代表,對于膜蛋白溶化特別有效;兼性離子型結(jié)合了離子型和非離子型去垢劑的優(yōu)點,以CHAPS為代表,一般用于膜蛋白結(jié)晶。
內(nèi)容企劃:鄒禮平
內(nèi)容初審:周育紅