2022年6月2日，復(fù)旦學(xué)院團(tuán)隊(duì)在Cell在線發(fā)表文章[1]，報(bào)導(dǎo)了四次跨膜蛋白4（）可以介導(dǎo)膜上大創(chuàng)口的修補(bǔ)。研究者發(fā)覺(jué)在細(xì)胞膜遭到激光、去污劑、細(xì)胞焦亡和自然殺傷細(xì)胞造成的損傷后，會(huì)迅速的在損傷處富集，在膜上形成名為T(mén)EM（）的功能性結(jié)構(gòu)單元，然后進(jìn)一步組裝產(chǎn)生微米級(jí)宏結(jié)構(gòu)域，限制膜損傷的擴(kuò)張以后對(duì)膜損傷進(jìn)行修補(bǔ)，借以維持細(xì)胞在膜損傷后的正常生理功能。
另外，異常抒發(fā)的膜蛋白也常被用做抗生素靶向，但是在膜蛋白研究中，最難的莫過(guò)分膜蛋白的抒發(fā)和純化，如：
●膜蛋白大多難溶于水，在制備過(guò)程中須要脂類或去垢劑包裹
●在外源抒發(fā)過(guò)程中容易損傷細(xì)胞，導(dǎo)致抒發(fā)量低
●在純化時(shí)因?yàn)樘穷惔嬖?strong>細(xì)胞膜蛋白，蛋白會(huì)有損失，回產(chǎn)率低
●蛋白與膜分離后，氫鍵難維持易集聚失活
假如你也在膜蛋白制備中苦苦掙扎沒(méi)有出路，丁香園將聯(lián)合義翹為你們帶來(lái)「多次跨膜蛋白的制備策略及案例分享」主題直播細(xì)胞膜蛋白，除了詳盡講解膜蛋白研究進(jìn)展與技術(shù)重難點(diǎn)，就會(huì)從實(shí)際案例中分享膜蛋白開(kāi)發(fā)研究策略，幫助你清掃膜蛋白研究中的障礙！
這么直播開(kāi)始前，我們先來(lái)對(duì)膜蛋白純化可能碰到的問(wèn)題怎樣解決一睹為快吧～
膜蛋白不抒發(fā)或則抒發(fā)量低
可以選擇對(duì)目的片斷重新建立，進(jìn)行密碼子優(yōu)化或改變抒發(fā)寄主，也可以添加促溶標(biāo)簽或輔助蛋白。
蛋白構(gòu)型不穩(wěn)定且易集聚
添加輔助蛋白來(lái)確保構(gòu)型正確，對(duì)個(gè)別可能導(dǎo)致集聚結(jié)構(gòu)域進(jìn)行截短或突變，調(diào)整蛋白緩沖液，添加還原劑或置換不同的去垢劑。
去垢劑千千萬(wàn)不會(huì)選
去垢劑大約分為非離子型、離子型和兼性離子型，非離子型以X-100和DDM為代表，通常比較溫和，不易造成蛋白質(zhì)變性；離子型以SDS為代表，對(duì)于膜蛋白溶化特別有效；兼性離子型結(jié)合了離子型和非離子型去垢劑的優(yōu)點(diǎn)，以CHAPS為代表，一般用于膜蛋白結(jié)晶。
內(nèi)容企劃：鄒禮平
內(nèi)容初審：周育紅