實(shí)驗(yàn)七亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的觀察-細(xì)胞骨架的觀察真核細(xì)胞中紛繁復(fù)雜的纖維網(wǎng)架，稱為細(xì)胞骨架（）。廣義的細(xì)胞骨架包括細(xì)胞核骨架、細(xì)胞質(zhì)骨架、細(xì)胞膜骨架和細(xì)胞外基質(zhì)。狹義的細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)骨架，包括：微絲（，MF，7nm）微管（，MT，25nm）中間纖維（，IF，10nm）細(xì)胞骨架（）細(xì)胞骨架的主要功能微絲（）微絲骨架是細(xì)胞內(nèi)高度動(dòng)態(tài)的結(jié)構(gòu),包括微絲的聚合、交聯(lián)、成束及解聚等形態(tài)變化.在細(xì)胞執(zhí)行各類運(yùn)動(dòng)功能或?qū)ν饨绱瘫虐l(fā)生反應(yīng)時(shí),微絲骨架經(jīng)常通過迅速地聚合與解聚來調(diào)整與改變其形態(tài)結(jié)構(gòu),因而維持細(xì)胞正常生理活動(dòng)的進(jìn)行微絲骨架在維持細(xì)胞形態(tài)、參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、胞質(zhì)分裂和極性完善等細(xì)胞生理活動(dòng)中飾演重要角色。G-actin、F-actin單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）和球狀肌動(dòng)蛋白（F-actin）的互相轉(zhuǎn)變是微絲骨架的功能基礎(chǔ)。肌動(dòng)蛋白是微絲的結(jié)構(gòu)成分，相對(duì)分子質(zhì)量是4.3×104，有三種異構(gòu)體，即α-actin、β-actin和γ-actin。
比較傳統(tǒng)的模型覺得微絲是由兩條肌動(dòng)蛋白單鏈呈左手螺旋盤繞產(chǎn)生的纖維，近些年來有些學(xué)者覺得微絲是由一條肌動(dòng)蛋白單體鏈產(chǎn)生的左手螺旋G---actinG-actin&F---、Mg2+、高K+、Na+Ca2+、低Na+、K+model微絲標(biāo)記方式微絲標(biāo)記分為在固定細(xì)胞中標(biāo)記微絲和活體細(xì)胞中標(biāo)記微絲。固定細(xì)胞中的微絲主要是用帶螢光探針的抗原或鬼筆環(huán)肽標(biāo)記，須要對(duì)樣品進(jìn)行物理固定和膜的通透。上皮細(xì)胞中的撓度纖維（微絲綠色、微管紅色）（圖片來自/）活體標(biāo)記螢光類似物標(biāo)記：指結(jié)合螢光探針的蛋白或氨基酸通過顯微注射的方式轉(zhuǎn)到細(xì)胞質(zhì)中，參與微絲的組裝或結(jié)合微絲因而突顯細(xì)胞骨架的重建。GFP融合蛋白標(biāo)記：GFP直接和肌動(dòng)蛋白融合GFP和全長或截短的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABP）融合細(xì)胞骨架研究中常用抗生素抗生素名叫做用細(xì)胞松馳素B(B,CB)結(jié)合在微絲的正端，阻抑其聚合，同時(shí)提升臨界含量細(xì)胞膜骨架，最終造成微絲的解聚鬼筆環(huán)肽()強(qiáng)烈親和微絲，結(jié)合在微絲中actin亞單位之間，穩(wěn)定微絲、促進(jìn)微絲聚合秋水仙素（）阻斷微管蛋白組裝成微管紫杉酚（taxol）推動(dòng)微管的裝配，穩(wěn)定已產(chǎn)生的微管實(shí)驗(yàn)原理(一)S.D.Pone用考馬斯亮藍(lán)染人皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞骨架獲得成功。
1982年北京動(dòng)物生理所陳梓卿采用動(dòng)物細(xì)胞為材料也獲成功。實(shí)踐證明這是一種簡(jiǎn)單易行的方式。當(dāng)細(xì)胞用適當(dāng)含量的X-100氨水（聚乙二醇辛基氰基醚，一種非離子去垢劑）處理，才能溶化質(zhì)膜結(jié)構(gòu)中及細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)，而微絲束結(jié)合得比較緊密，不容易被消除，經(jīng)固定和考馬斯亮蘭（非特異性蛋白質(zhì)顏料）染色后，可在光鏡下觀察到由微絲組成的纖維束。實(shí)驗(yàn)原理(二)鬼筆環(huán)肽()是從一種毒性牛肝菌中分離的劇毒生物堿，它同細(xì)胞松馳素的作用相反,只與聚合的微絲結(jié)合,而不與肌動(dòng)蛋白單體分子結(jié)合。它同聚合的微絲結(jié)合后,抑制了微絲的解體,從而破壞了微絲的聚合和解聚的動(dòng)態(tài)平衡。因?yàn)楣砉P環(huán)肽特別特異地結(jié)合并穩(wěn)定聚合態(tài)肌動(dòng)蛋白,因此對(duì)肌動(dòng)蛋白的動(dòng)態(tài)平衡導(dǎo)致嚴(yán)重影響.據(jù)悉,較高含量的鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞有殘害作用.因而,用鬼筆環(huán)肽標(biāo)記微絲并不是用于研究活體細(xì)胞的理想方式.實(shí)驗(yàn)?zāi)康陌盐占?xì)胞骨架的顯示方式了解光鏡下細(xì)胞骨架的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)材料和試劑材料：2BS人胚肺細(xì)胞、CHO中國貓咪子宮細(xì)胞、人肺炎A549細(xì)胞試劑：PEM緩沖液（50mMpipes（pH6.9）,5mMEGTA,5mMMgSO4,0.225M山梨醇），0.5%X-100（溶于PEM緩沖液），4%多聚甲醛（溶于PEM緩沖液）細(xì)胞膜骨架，0.2％考馬斯亮藍(lán)R250，55nMAlex-取出蓋片，于小平皿中37℃預(yù)溫PEM洗3次(每次1mL)2BS細(xì)胞、CHO、A549細(xì)胞培養(yǎng)于小蓋玻片上（爬片）實(shí)驗(yàn)步驟X-100處理約10min(1mL)37℃預(yù)溫PEM洗3次(每次1mL)37℃預(yù)溫4%多聚甲醛固定細(xì)胞15min(1mL)37℃預(yù)溫PEM洗數(shù)3次55nMAlex-10?L濕盒中溫度染色30min。
于小平皿中加入0.2％考馬斯亮藍(lán)R2501mL溫度染色30min37℃預(yù)溫PEM洗數(shù)3次每次10min螢光鏡下觀察用小磨片削去長圓形蓋玻片的一角作為標(biāo)記便于辨識(shí)細(xì)胞面。細(xì)胞密度60-80%注意蓋玻片的正背面請(qǐng)勿形成氣泡！在膜上加PEM，待蓋玻片被沖起后，再輕輕揭下蓋玻片。分餾水洗3-5遍鏡下觀察避光操作注意事項(xiàng)注意不要打碎蓋片，分清細(xì)胞所在面；各步洗細(xì)胞要輕，勿使細(xì)胞開裂；螢光觀察注意避光操作節(jié)省試劑。實(shí)驗(yàn)報(bào)告和思索題實(shí)驗(yàn)報(bào)告通過查找文獻(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行剖析討論。思索題PEM緩沖液的作用是哪些？1％X-100處理細(xì)胞的作用是哪些？考馬斯R250和鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞骨架的染色有哪些區(qū)別，各有哪些異同點(diǎn)？正常細(xì)胞和癌癥細(xì)胞微絲骨架的區(qū)別