細胞膜黑色螢光染色試劑盒(DiI)，CellKitwithDiI(Red)是一種以DiI為螢光探針，并提供了染色提高劑、能快速靈敏地對細胞膜進行藍色螢光染色標記的試劑盒。
DiI即(3)，全稱為1,1'--3,3,3',3'-細胞膜片，分子式為，分子量為933.88，CAS號為41085-99-8，是最常用的細胞膜螢光探針之一，呈現(xiàn)橙黃色螢光。DiI是一種親脂性羰花青()顏料，具有很長的親脂性烴鏈，步入細胞膜后可以側(cè)向擴散逐步使整個細胞的細胞膜被染色，染色后十分穩(wěn)定。
DiI在步入細胞膜之前螢光十分弱，僅當步入到細胞膜后才可以被迸發(fā)出很強的螢光。DiI被迸發(fā)后可以發(fā)出橙黃色的螢光，DiI和磷酯單層膜結(jié)合后的迸發(fā)波譜和發(fā)射波譜參考圖1。其中，最大迸發(fā)波長為549nm，最大發(fā)射波長為565nm。
圖1.DiI和磷酯單層膜結(jié)合后的迸發(fā)波譜和發(fā)射波譜。
DiI被廣泛用于正向或逆向的、活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或常年示蹤劑(long-term)。DiI毒性很低，一般不會影響細胞的生存力()。被DiI標記的神經(jīng)細胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活歷時4周，在體內(nèi)可以歷時一年。DiI在經(jīng)過固定的神經(jīng)元細胞膜上的遷移速度為0.2-0.6mm/day，在活的神經(jīng)元細胞膜上的遷移速度為6mm/day。
本試劑盒提供了染色提高劑，使細胞膜染色更推動速，螢光染色愈發(fā)明亮細胞膜片，染色背景更低。
本試劑盒不僅最簡單的細胞膜螢光標記外，還可以用于測量細胞的融合和黏附，測量發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(After)測量脂在細胞膜上的擴散，測量細胞毒性和標記脂蛋白等。
本試劑盒可以直接染色活的細胞或組織，染色時間一般為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，一般宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當?shù)墓潭ㄒ簳斐晌灩獗尘拜^高。本試劑盒對HeLa細胞的染色療效參考圖2。
圖2.細胞膜黑色螢光染色試劑盒(DiI)對HeLa細胞的染色療效。DiI的染色時間為10分鐘。
DiI染色后可以兼容免疫螢光實驗。建議使用碧云天的免疫染色通透液()(P0095)或使用洋玄參鞣質(zhì)()配制的不會溶化細胞膜的通透液進行通透，其它去垢劑配制的通透液可能會溶化細胞膜上的脂質(zhì)物質(zhì)，導(dǎo)致DiI喪失結(jié)合位置，最終造成DiI的染色失效。但通透也可能會影響DiI在細胞膜上的定位并會降低細胞內(nèi)的染色，具體實驗中需按照實驗的需求選擇合適的細胞通透液。
本試劑盒大包裝，假如用于流式細胞儀，每位樣品的測量體系容積為0.5ml時，可以進行200次測量；96孔板每孔測量體系的容積為100μl時可以進行1000次測量。
包裝清單：