一、膜蛋白簡介
膜蛋白在細(xì)胞中飾演著重要的角色：比如被熟知的辨識、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、運(yùn)輸?shù)裙δ埽彩欠幍睦硐氲陌邢颍m植物細(xì)胞主要有9種膜脂，而膜蛋白的種類繁雜，多數(shù)膜蛋白分子數(shù)量較少，但卻賦于細(xì)胞膜十分重要的生物學(xué)功能。
按照膜蛋白分離的難易及其與脂分子的結(jié)合形式，膜蛋白可分為兩大類型：外在膜蛋白、內(nèi)在膜蛋白。
(1)外在膜蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質(zhì)分子或脂分子結(jié)合，因而只要改變堿液的離子硬度甚至提升體溫就可以從膜上分離出來，膜結(jié)構(gòu)并不被破壞。
(2)內(nèi)在膜蛋白與膜結(jié)合十分緊密，通常只有用去垢劑()使其膜解后才可分離下來。
附注：使用分級抽提方式獲得的“膜蛋白”中只有極少一部份是具備多跨膜區(qū)的整合膜蛋白。
二、膜蛋白的提取方式
談及蛋白分離，我們想到：超速離心，鹽析法、超濾法、凝膠過濾法、等電點(diǎn)沉淀法、離子交換層析、親和層析、吸附層析、逆流分溶、酶解法……有時(shí)這種方式往往組合到一起對特定的物質(zhì)進(jìn)行分離純化。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)種類繁雜，不同的蛋白質(zhì)因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)和組成的差別，其溶化度也各不相同.按照蛋白質(zhì)的溶化特點(diǎn)，同時(shí)可選擇不同的溶劑提取，分為水堿液提取和有機(jī)溶劑提取.
然而與胞質(zhì)蛋白，核蛋白提取不同之處在于膜蛋白是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方式就是用不同的離心速率除去胞質(zhì)蛋白等，之后用去污劑把蛋白從膜中釋放下來。膜蛋白分離純化的重要步驟是選擇適當(dāng)?shù)脑鋈苡帽砻婊钚詣ǔ３Ｓ玫挠心懡j(luò)合物，CHAPS(一種離子去污劑），和等表面活性劑。
1）先分離膜，之后提取；如選用冷熱交替法、反復(fù)凍融法、超聲破碎法、玻璃勻漿法、自溶法和酶處理法促使細(xì)胞破碎，之后通過梯度離心得到富含膜蛋白的粗組分。（比如：用液氮碾磨組織，加入勻漿緩沖液及蛋白酶抑制劑，之后差速離心、蔗糖密度梯度離心。搜集37%與41%間的成份，即為質(zhì)膜部份。裂解即可搜集膜蛋白）
2）用特殊的去污劑選擇性的分離。從膜上提取蛋白有許多困難。在多數(shù)情況下，都是采用去垢劑將疏水蛋白從其膜結(jié)構(gòu)中溶化出來，之后將蛋白質(zhì)穩(wěn)定。去垢劑的選擇一般是根據(jù)他對所須要蛋白質(zhì)的提取效率來確定細(xì)胞膜色譜，但在個(gè)別情況下，還要考慮到之后的純化步驟。其實(shí)許多膜蛋白必須在去垢劑存在的情況下進(jìn)行純化，但最終仍可能須要去除去垢劑。這往往會導(dǎo)致蛋白質(zhì)失活，但若果蛋白質(zhì)是用于測序的，他將不是一個(gè)問題。倘若不是用于測序的細(xì)胞膜色譜，可考慮使用才能粘附去垢劑的疏水珠.許多文獻(xiàn)和生化試劑供應(yīng)商的產(chǎn)品目錄中，都介紹有許多種不同的可拿來溶化膜蛋白的去垢劑.但是，她們并不是普遍適用的.在設(shè)計(jì)膜蛋白溶化方案時(shí)，必須考慮某一去垢劑的特殊性質(zhì).如X-100在280nm處有吸收，假若某蛋白質(zhì)的測試與280nm處的吸收有關(guān)，就應(yīng)防止使用這類去垢劑.
將膜劑型與胞質(zhì)蛋白及細(xì)胞核分離后，再進(jìn)一步從細(xì)胞膜劑型上將所需的膜蛋白增溶出來.這些做法的用處是可以用強(qiáng)烈的去垢劑提取細(xì)胞骨架的相關(guān)蛋白，而無需考慮胞質(zhì)蛋白、細(xì)胞核成份或染色質(zhì)成份的混進(jìn).使用這些方式所獲得的膜蛋白，無論在種類上還是數(shù)目上，都比酸溶化法所得到的蛋白（
3)膜蛋白色譜(of,CMP)：CMP分離強(qiáng)疏水性蛋白、多肽混和物的層析系統(tǒng)，通常有去垢劑（如SDS）溶化膜蛋白后產(chǎn)生SDS-融膜蛋白，并由甲基磷灰石為固定相的木柱分離純化。甲基磷灰石柱具有陰離子乙酸官能團(tuán)（P-端），又具有陽離子鈣（C-端），與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小、SDS結(jié)合量。借助原子散射法研究cAMP的分離機(jī)制發(fā)覺，樣品與SDS結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS分子、帶電荷多肽與固定相中帶電離子間的交換，進(jìn)而達(dá)到分級分離的目的。
4)次序抽提法：按照細(xì)胞蛋白溶化性的差別，器具有不同溶化能力的蛋白溶化液進(jìn)行抽提的方式。用Tris堿堿液裂解細(xì)胞提取高溶化性蛋白；把未溶化的沉淀用標(biāo)準(zhǔn)液溶化提取高疏水性蛋白；最后用含復(fù)合表面活性劑的蛋白溶化液，可以再度抽提前兩次抽提后不能溶化的膜蛋白。
5)離心蛋白提取法（）
原理：高滲的蛋白裂解液讓細(xì)胞縮聚斷裂后，超高速離心
評價(jià)：雖然分級(胞漿和胞膜)之間有清洗的步驟,并且可溶性蛋白組分和膜蛋白組分之間依然有不少重復(fù)的點(diǎn).該方式相較MP院士在1998年上發(fā)表的分級抽提法除以了第一步(用tris抽提水溶性蛋白)和最后一步(極難溶蛋白),在操作上也作了簡化,總而言之是一種不錯(cuò)的方式。
6)-based：提取時(shí)先用裂解液裂解胞膜（選用不同的去污試劑是關(guān)鍵），梯度離心分離細(xì)胞器(ER)，之后分級抽提方式。諸如，除去細(xì)胞器以后的就是核膜，再裂解得到核膜蛋白。而膜蛋白是裂胞膜時(shí)不溶的部份。
總的體會：細(xì)胞的量要很充足。以后的定性鑒別常用的技巧有單向免疫擴(kuò)散、免疫電泳及聚丙稀丙酯凝膠電泳等。純化蛋白質(zhì)含量的定量測定可用雙縮脲法、酚試劑法或紫外光吸收法定量鑒別膜蛋白，便捷迅速。