Lyso-Green是一種溶酶體()紅色螢光探針,能通透細胞膜,可以用于活細胞溶酶體特異性螢光染色。
Lyso-Green為采用公司的DND-26進行了螢光標記的帶有弱酸性的螢光探針,其中僅弱堿可部份提供質子,以維持pH在中性,可以選擇性地滯留在偏堿性的溶酶體中,進而實現對于溶酶體的特異性螢光標記。中性紅(Red)和吖啶橙()也都可以對溶酶體進行螢光染色,但中性紅和吖啶橙的染色缺少特異性。Lyso-Green適用于活細胞染色,但不適宜用于固定后細胞的染色。
Lyso-Green的分子式為,分子量為398.7,其最大迸發光波長為504nm,最大發射光波長為511nm。Lyso-Green的物理結構式和迸發、發射波譜圖參考圖1。
圖1.Lyso-Green的物理結構式(A)和迸發、發射波譜圖(B)。
Lyso-Green是嗜酸性螢光探針,用于活細胞內堿性細胞器的標記和示蹤。這種探針具有幾個重要特點細胞膜選擇性通透,包括高度選擇靶點堿性細胞器和在納摩爾含量有效標記活細胞。Lyso-Green必須在極低含量(一般約50nM)下就能獲得優異的選擇性。這種探針的滯留()機制似乎沒有被研究清楚,但很可能與堿性細胞器的質子化和滯留性有關,Lyso-Green探針的內吞作用動力學研究顯示顏料步入活細胞的攝取時間僅幾秒即可。但是,這種溶酶體探針會造成溶酶體被堿化,常年孵育會促使溶酶體pH值的降低。為此,建議成像前用探針孵育細胞的時間不能太久。Lyso-Green探針具體使用含量和孵育時間須要依照自身實驗條件和具體細胞種類來進行摸索以達到滿意的染色療效。Lyso-Green染色活細胞溶酶體的療效請參考圖2。
圖2.Lyso-Green染色NRK-52E細胞(小鼠腎小管上皮細胞)的療效圖。33342染色的NRK-52E細胞其細胞核呈現紅色螢光;Lyso-Green染色的NRK-52E細胞其溶酶體呈現紅色螢光。
根據1:20,000的比列稀釋細胞膜選擇性通透,可以配制Lyso-Green工作液。
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