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暗視野顯微鏡的基本使用方法有哪些?如何使用?

更新時間:2024-02-26 文章作者:佚名 信息來源:網絡整理 閱讀次數:

(1) 暗視野顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(2)體視顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(3)熒光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(4) 相差顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(5)倒置顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(6) 偏光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

(1) 暗視野顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

暗視野顯微鏡不具備觀察物體內部精細結構的功能,但可以區分0.004μm以上顆粒的存在和運動。 因此,常被用來觀察活細胞的結構和細胞內顆粒的運動。sEl物理好資源網(原物理ok網)

暗視野顯微鏡的基本原理是廷德爾效應。 當一束光穿過暗室時,從垂直于入射光的方向可以在空氣中觀察到一條明亮的灰塵“路徑”。 這種現象就是丁達爾效應。sEl物理好資源網(原物理ok網)

普通光學顯微鏡上暗場顯微鏡更換為暗場聚光鏡后,由于聚光鏡內部拋物面結構的阻擋,照射到被檢物體表面的光線無法直接進入物鏡鏡頭和目鏡。 只有散射光可以通過,所以視野是黑暗的。 操作者通過目鏡觀察到的是被檢物體的衍射光圖像(圖1-2)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

使用暗視野顯微鏡的基本方法如下:sEl物理好資源網(原物理ok網)

1、安裝暗場聚光鏡(或者用一張厚黑紙做遮光罩,放在普通顯微鏡的聚光鏡下即可得到暗場效果)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

2. 使用強光源,通常是顯微鏡燈,以防止直射光進入物鏡。sEl物理好資源網(原物理ok網)

3、在聚光鏡和載玻片之間加入一滴雪松油,防止照明光在聚光鏡上完全反射而不能到達被檢查物體,造成暗場照明。sEl物理好資源網(原物理ok網)

4、進行調心,即水平移動聚光鏡,使聚光鏡光軸與顯微鏡光軸嚴格一致。 升降聚光鏡,將聚光鏡的焦點(圖1-2中錐束的頂點)對準被檢物體。sEl物理好資源網(原物理ok網)

5、選擇與聚光鏡對應的物鏡,調節焦距,像普通顯微鏡一樣操作。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(2)體視顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

體視顯微鏡也稱為實體顯微鏡或解剖顯微鏡。 其圖像為正立三維空間圖像,具有立體感強、圖像清晰寬廣、工作距離長(通常為110毫米)、連續放大觀看等特點。 在生物學中偏光顯微鏡補償器的作用,它常用于解剖學過程中的實時觀察(圖1-3)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

普通光學顯微鏡的光源是平行光,從而形成二維平面圖像; 而體視顯微鏡則采用雙通道光路,雙目鏡筒內的左右光束具有一定的視角(通常為 ),從而形成三維空間的立體圖像。sEl物理好資源網(原物理ok網)

體視顯微鏡的使用與普通光學顯微鏡類似,但更方便。 兩者之間的主要區別是:sEl物理好資源網(原物理ok網)

1、體視顯微鏡檢查的對象無需制作成封片膜。sEl物理好資源網(原物理ok網)

2、體視顯微鏡載物臺直接固定在鏡座上,配有黑白雙面板或玻璃板。 操作者可根據顯微鏡的對象和要求進行選擇。sEl物理好資源網(原物理ok網)

3、體視顯微鏡成像為直立,方便解剖操作。sEl物理好資源網(原物理ok網)

4、體視顯微鏡只有一個物鏡,通過旋轉調節螺桿可以連續調節其放大倍數。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(3)熒光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

熒光顯微鏡是利用細胞內物質發出的熒光強度進行定性和定量研究的光學工具。sEl物理好資源網(原物理ok網)

細胞中有兩種熒光物質。 一類受紫外線照射后可直接發出熒光,如葉綠素。 還有一些物質本身不具有這種性質,但如果用特定的熒光染料或熒光抗體染色,在受到紫外線照射后就會發出熒光。 照射后也可發出熒光(圖 1-4)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

熒光顯微鏡的原理是利用高光效點光源(如超高壓汞燈)通過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光3650λ或紫藍光4200λ)作為激發光來激發樣品中的熒光物質。 各種顏色的熒光發出后,經過物鏡后面的阻擋(或抑制)濾光片過濾,最后通過目鏡的放大倍數進行觀察。sEl物理好資源網(原物理ok網)

阻擋濾光片有兩個作用:一是吸收并阻擋激發光進入目鏡,避免干擾熒光,損傷眼睛;二是吸收阻擋激發光。 另一種是選擇并讓特定的熒光通過,以顯示特定的熒光顏色。sEl物理好資源網(原物理ok網)

熒光顯微鏡按光路原理可分為兩種:sEl物理好資源網(原物理ok網)

1.透射熒光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

在較舊的熒光顯微鏡中,激發光源通過聚光鏡穿過樣本材料以激發熒光。 優點是低倍時熒光較強,缺點是隨著倍率增大熒光減弱。 因此只適合觀察較大的標本材料。sEl物理好資源網(原物理ok網)

2.落射熒光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

激發光從物鏡向下落到樣品表面,即照明聚光鏡和收集熒光的物鏡使用同一物鏡(圖1-5)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

光路中需要添加二向色分光鏡(二向色鏡),與光軸成45°角。 激發光反射到物鏡中并聚集在樣品上。 樣品產生的熒光被物鏡和蓋子的表面反射。 載玻片表面反射的激發光同時進入物鏡,返回二向色分光鏡,將激發光和熒光分離。 然后剩余的激發光被阻擋濾光片吸收。 如果使用不同的激發濾光片/雙色分束器/阻擋濾光片組合插片,則可以滿足不同熒光反應產物的需求。sEl物理好資源網(原物理ok網)

這種熒光顯微鏡的優點是視場照明均勻,圖像清晰,放大倍數越大,熒光越強。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(4) 相差顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

相差顯微鏡是一種可以將光線通過物體時產生的相位差(或光程差)轉換為振幅(光強)變化的顯微鏡。 主要用于觀察活細胞、未染色的組織切片或缺乏對比度的染色標本。sEl物理好資源網(原物理ok網)

人眼只能識別可見光的波長(顏色)和振幅的變化,而不能識別相位的變化。 大多數生物標本都是高度透明的,光波穿過它后振幅基本保持不變,只有相位發生變化。sEl物理好資源網(原物理ok網)

相差顯微鏡基本上是將透過標本的可見光的光程差轉變為振幅差,從而提高各種結構之間的對比度,使各種結構清晰可見。 光線穿過標本后發生折射,偏離原來的光路,并被延遲1/4λ(波長)。 如果增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光束合并后發生干涉。 加強、增加或減少幅度,并增加對比度(見圖 6)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

從結構上看偏光顯微鏡補償器的作用,相差顯微鏡與普通光學顯微鏡的區別是:sEl物理好資源網(原物理ok網)

1、環形光闌有一個環形開口,安裝在光源和聚光鏡之間。 其作用是使通過聚光鏡的光線形成空心光錐并聚焦在標本上。sEl物理好資源網(原物理ok網)

2、相位板相差顯微鏡在物鏡內部增加了一塊涂有氟化鎂的相位板,使直射光或衍射光的相位延遲1/4λ。 相位板上有兩個區域,直射光通過的部分稱為“共軛面”,衍射光通過的部分稱為“補償面”。 相位板按其工作作用分為兩種:sEl物理好資源網(原物理ok網)

(1) A+相位板:使直射光延遲1/4λ。 兩組光波組合后,光波疊加,振幅增大。 標本結構比周圍介質更亮,形成亮對比度(或負對比度)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(2) B+相位板:使衍射光延遲1/4λ。 兩組光線合成后,光波相減,振幅變小,標本結構比周圍介質更暗,形成暗對比度(或正對比度)。 帶相位板的物鏡稱為相襯物鏡,在物鏡外殼上常標有“Ph”字樣。sEl物理好資源網(原物理ok網)

同軸可調望遠鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

相差顯微鏡配有同軸調節望遠鏡(外殼上標有“CT”符號),用于調節環形光闌,使圖像與相位板的共軛面完全一致,從而實現對直射光和衍射光的特殊處理。 。sEl物理好資源網(原物理ok網)

使用時,取下一側目鏡,插入望遠鏡調軸,調整軸即可調節望遠鏡的焦距,視野內會出現兩個環,即較亮的環形光圈環和較暗的環形光圈環。共軛在相位板上。 面環。 然后轉動聚光器上環形膜片的兩個調節螺釘,使兩個環完全重疊。 如果明亮的光暈太小或太大,請調節聚光鏡的升降旋鈕,使兩個環完美匹配。 如果聚光鏡已升到最高點或降到最低點仍無法校正,則說明載玻片太厚,應更換。 調整完畢后,可以拆下同軸調整望遠鏡,換上目鏡。sEl物理好資源網(原物理ok網)

綠色濾光片sEl物理好資源網(原物理ok網)

用于調節光源的波長。 不同波長的照明光會引起相位變化。 為了獲得良好的相襯效果,相襯顯微鏡需要使用波長范圍較窄的單色光,通常用綠色濾光片進行調節。sEl物理好資源網(原物理ok網)

使用相差顯微鏡的步驟如下:sEl物理好資源網(原物理ok網)

① 根據被檢樣品的性質和要求,選擇合適的相襯物鏡。sEl物理好資源網(原物理ok網)

② 將載玻片放置在載物臺上,調整光軸中心。sEl物理好資源網(原物理ok網)

③利用望遠鏡的同軸調節,調節環形光闌與相位板上的共軛面環完全重合,然后更換目鏡。 在觀察過程中,每次改變物鏡放大倍數時,都必須重新調整環形光闌以與相位板共軛面的環相匹配。sEl物理好資源網(原物理ok網)

④ 加綠色濾光片,按照普通光學顯微鏡的操作步驟進行觀察。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(5)倒置顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

倒置顯微鏡的結構與普通顯微鏡基本相同,只是交換了物鏡和照明系統的位置。 前者在臺下,后者在臺上。 主要用于觀察培養的活細胞,需要配備相差物鏡。sEl物理好資源網(原物理ok網)

(6) 偏光顯微鏡sEl物理好資源網(原物理ok網)

偏光顯微鏡可用于檢測雙折射物質,如染色體、膠原蛋白、纖維等(圖1-7)sEl物理好資源網(原物理ok網)

與普通顯微鏡的區別在于:sEl物理好資源網(原物理ok網)

① 偏光顯微鏡在光源前面裝有起偏器(偏光鏡),使進入顯微鏡的光發生偏振。sEl物理好資源網(原物理ok網)

②鏡筒內有檢偏器(檢偏器,偏光方向與偏光器垂直的偏光器)。sEl物理好資源網(原物理ok網)

③ 使用旋轉臺。 當單個折射物質放置在載物臺上時,無論載物臺如何旋轉,由于兩個偏光鏡是垂直的,因此在顯微鏡中看不到光。 當放置雙折射物質時,光穿過這種類型的材料。 物體被物體偏轉,從而使旋轉臺能夠檢測到此類物體。sEl物理好資源網(原物理ok網)

④ 配備補償器或相位膜;sEl物理好資源網(原物理ok網)

⑤ 使用專用無應力物鏡。sEl物理好資源網(原物理ok網)

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