給大家分享一些食品醫(yī)院復試時可能會問到的微生物實驗的相關(guān)原理和操作。 請注意，“僅供參考，因為很可能未經(jīng)測試?！?span style="display:none">64U物理好資源網(wǎng)(原物理ok網(wǎng))
使用普通顯微鏡、觀察細菌形態(tài)的目的是為了學習和掌握油鏡的原理和使用方法。
復習光學顯微鏡各部分的結(jié)構(gòu)、功能和用途。
原則
微生物最顯著的特點是它們很小，它們的個體形態(tài)和細胞結(jié)構(gòu)必須借助顯微鏡來觀察。 熟悉顯微鏡并掌握其操作技術(shù)是研究微生物不可或缺的手段。 本實驗將介紹當前微生物研究中最常用的普通光學顯微鏡的結(jié)構(gòu)和樣品制備。 目的是讓學生通過實驗對光學顯微鏡有一個全面的了解，并重點掌握油鏡在明視場普通光學顯微鏡中的使用。
材料應變
金黃色葡萄球菌 () 和枯草芽孢桿菌 () 對載玻片標本進行染色。 鏈霉菌 () 和青霉菌 () 的水封玻片。
溶液或試劑：雪松油、二甲苯。
儀器或其他設(shè)備、顯微鏡、擦鏡紙等
過程
安裝光源，調(diào)整目鏡，調(diào)整聚光鏡、低倍鏡和高倍鏡，清潔并恢復油鏡。
步驟觀察前的準備
1.1. 顯微鏡放置
將顯微鏡放置在平坦的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約10cm。 鏡檢時姿勢應正確。
1.2. 光源調(diào)節(jié)
安裝在鏡架內(nèi)的光源燈可以通過調(diào)節(jié)電壓獲得合適的照明亮度。 如果采用反射鏡收集自然光或燈光作為照明光源，則應根據(jù)光源的強度和所用物鏡的放大倍數(shù)來選擇凹面或凸面反射鏡。 調(diào)整其角度，使視野內(nèi)光線均勻，亮度合適。
1.3. 雙目顯微鏡目鏡調(diào)節(jié)
根據(jù)使用者的個人情況，可以適當調(diào)節(jié)雙目顯微鏡的目鏡之間的距離，左目鏡一般都配有屈光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應不同觀察者不同眼距或視力差異的情況。兩只眼睛。
1.4. 聚光鏡數(shù)值孔徑值的調(diào)整只有正確使用聚光鏡，才能提高顯微檢查的效果。 聚光鏡的主要參數(shù)是數(shù)值孔徑，它有一定的可變范圍。 一般情況下，聚光鏡邊框上的數(shù)字代表其最大數(shù)值孔徑。 通過調(diào)節(jié)聚光鏡下可變光闌的開度，可以獲得各種數(shù)值孔徑，以適應不同物鏡的需要。
顯微鏡觀察
在目鏡不變的情況下，使用不同倍率的物鏡所能達到的分辨率和放大倍數(shù)是不同的。 一般情況下，尤其是初學者在進行顯微觀察時，應遵循從小倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因為低倍物鏡的視場比較大，使得輕松找到目標并確定檢查位置。
2.1. 低倍觀察
將金黃色葡萄球菌染色的標本載玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動螺旋槳偏光顯微鏡的使用方法，使觀察物體位于物鏡正下方。 降低 10 倍物鏡，使其靠近標本。 使用粗調(diào)器緩慢升起鏡筒，使標本最初聚焦在視野中。 然后用微調(diào)器將圖像調(diào)整到清晰。 通過載玻片夾推動器緩慢移動載玻片，仔細觀察標本的各個部分，找到合適的目標物體，仔細觀察并記錄觀察結(jié)果。
2.2 高倍觀察
在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其移至視場中心后，將高倍鏡移至工作位置。 適當調(diào)整聚光鏡孔徑和視場亮度后，再微調(diào)微調(diào)器，使物像清晰。 利用螺旋槳移動標本找到需要觀察的部位偏光顯微鏡的使用方法，移至視場中心仔細觀察或準備用油鏡觀察。
2.3 油鏡觀察 在高倍鏡或低倍鏡下找到待觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)器升起鏡筒，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。 在待觀察的樣品區(qū)域滴一滴雪松油，從側(cè)面觀察，用粗調(diào)器小心地降低鏡筒，使油鏡浸入油中，直至幾乎與標本接觸（注意：不要將油鏡片壓下去，否則不僅會壓碎玻璃還會損壞鏡片）。 將聚光器升到最高位置，打開光圈（如果所用聚光器的數(shù)值孔徑值超過1.0，還應在聚光器與滑道之間加入一滴雪松油，以保證達到最大效率），調(diào)節(jié)確保視野的亮度與照明相適應。 使用粗調(diào)器緩慢抬起鏡筒，直至視野中出現(xiàn)物像，然后使用微調(diào)器使其清晰對焦。
顯微鏡的使用后處理：抬起鏡筒并取出載玻片。 使用鏡頭紙清潔其他物鏡和目鏡，使用絲布清潔顯微鏡的金屬部件。 將所有部件復原，使反射鏡與鏡座垂直，將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，然后向下轉(zhuǎn)動。 同時放下聚光鏡，避免物鏡與聚光鏡碰撞，蓋上鏡頭蓋，放回原位。
結(jié)果
畫出分別在低倍、高倍和油鏡下觀察到的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、鏈霉菌和青霉菌的形態(tài)，包括三種條件下視場的變化，并標明物鏡的放大倍數(shù)。 倍數(shù)和總放大倍數(shù)。
使用油鏡觀察時應注意哪些問題？ 載玻片和鏡片之間應該加什么油？ 它的作用是什么？
答：先用擦鏡紙清潔鏡片，防止上次實驗污染。 添加雪松油可以提高折射率，這意味著提高顯微鏡的分辨率。
使用高倍鏡片、油鏡片時為什么要特別注意避免粗調(diào)器誤操作？
答：使用高倍鏡和油鏡時，鏡片離標本越近，粗調(diào)器的調(diào)節(jié)范圍就越大。 粗調(diào)器誤操作會導致鏡片向標本方向大幅度移動，很容易損壞標本和鏡片。 一般情況下，首先使用低倍率鏡頭尋找物像，然后切換至高倍率鏡頭。 那么你只需要使用微調(diào)器即可。
什么是物鏡的共焦現(xiàn)象？ 它在顯微鏡觀察中有什么意義？
答：共焦現(xiàn)象是指物像在一個物鏡中清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置觀察時，物像基本保持在焦點上。 這種現(xiàn)象稱為物鏡的共焦（）。 利用這種共焦現(xiàn)象，當使用高倍物鏡時，我們可以先用低倍物鏡調(diào)整焦距，然后再切換到高倍物鏡。 這就保證了當使用高倍率、短工作距離的物鏡，如高倍鏡或油鏡時，僅用微調(diào)器就可以清晰地聚焦物像，從而避免鏡頭損壞或造成損壞。使用粗調(diào)器時可能發(fā)生的誤操作。 幻燈片。 同時，由于低倍物鏡的視場遠高于高倍物鏡，更有利于尋找觀察物體的位置。 （即轉(zhuǎn)換倍率時，無需再次調(diào)整焦距）
影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？
答：顯微鏡的分辨率是由物鏡決定的。 分辨率與波長和物鏡的數(shù)值孔徑有關(guān)。 減小波長和增大數(shù)值孔徑可以提高顯微鏡的分辨率。 分辨率決定了位圖圖像的細節(jié)程度。
結(jié)合實驗經(jīng)驗，談談如何根據(jù)被觀察微生物的大小，選擇不同的物鏡進行有效觀察。
答：對于細菌使用油鏡，對于真菌使用高倍鏡。 先用低倍鏡尋找目標，然后用高倍鏡調(diào)整到合適的視野和合適的清晰度。
備注（顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和使用說明書）
普通光學顯微鏡使用兩個透鏡系統(tǒng)：目鏡和物鏡來放大圖像。 它們由兩大部分組成：機械裝置和光學系統(tǒng)。 顯微鏡的光學系統(tǒng)包括四個部件：物鏡、目鏡、反射鏡和聚光鏡。 其中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它直接影響顯微鏡的分辨率。
顯微鏡結(jié)構(gòu)示意圖（1目鏡2鏡筒3轉(zhuǎn)換器4物鏡5載物臺6聚光器7虹彩光闌8反射鏡9鏡座10粗調(diào)螺絲11微調(diào)螺絲12鏡臂）
一般微生物學使用的顯微鏡??有三種物鏡，即低倍鏡（4×~10×）、高倍鏡（40×~45×）和油鏡（90×-100×），它們是對于微生物學研究最重要。 使用油鏡時，需要在載玻片和鏡片之間滴幾滴雪松油。 一方面，它增加了照明的亮度。 油透鏡放大倍數(shù)大、焦距短、直徑小，但需要的光強度最大。 由于介質(zhì)的密度不同（從玻璃進入空氣，然后進入物鏡），從承載標本的載玻片透射的部分光線因折射或全反射而無法進入物鏡。 因此，使用油透鏡時，光線不會進入透鏡。 進入的光線較少，物體圖像顯得不清晰。 為了減少通過光的損失，在使用油透鏡時，必須在油透鏡之間添加與玻璃折射率（n=1.55）相似的透鏡油（通常是折射率n=1.52的雪松油）和玻璃。 另一方面是提高顯微鏡的分辨率。 顯微鏡的分辨率或倍率是指顯微鏡區(qū)分兩點之間最小距離的能力。 顯微鏡的質(zhì)量主要取決于分辨率（D:）的大小：
分辨率最大可分辨距離（ ）
式中，λ=光波波長； NA = 物鏡的數(shù)值孔徑值。 光學顯微鏡的光源不能超過可見光的波長范圍（0.4~0.7μm），數(shù)值孔徑值取決于物鏡的透鏡角度以及載玻片與透鏡之間介質(zhì)的折射率，可表示為： NA= n.sin α 。 其中α是光最大入射角的一半。 這取決于物鏡的直徑和焦距。 一般來說，在實際應用中，最大只能達到120°，n為介質(zhì)的折射率。 由于杉木油的折射率 (1.52) 高于空氣和水的折射率 (分別為 1.0 和 1.33)，因此使用杉木油作為鏡頭和玻璃之間介質(zhì)的油透鏡的數(shù)值孔徑 (NA)一般可以達到1.2~1.4之間），高于低倍物鏡和高倍物鏡（NA低于1.0）。 如果按照可見光平均波長0.55μm計算，通常數(shù)值孔徑在0.65左右的高倍鏡只能分辨不小于0.4μm距離的物體，而油鏡的分辨率可達約0.2微米。 大多數(shù)細菌的直徑都在0.5um以上，因此油鏡可以更好地看到細菌的個體形狀。
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