明視野顯微鏡是一種常見的顯微鏡檢查方法,廣泛應用于病理學和檢查中觀察染色切片。 所有顯微鏡都可以完成這個功能。
2.暗視野觀察(Dark field DF)
暗場實際上是暗場照明。 其特點與明場不同。 它不直接觀察照明光,而是觀察被檢查物體反射或衍射的光。 因此,視野變成黑暗的背景,而被檢查的物體則呈現明亮的圖像。
暗場的原理基于光學廷代爾現象。 當強光直接穿過灰塵時,人眼無法觀察到。 這是由強光的衍射引起的。 如果你用光線傾斜地照射它,由于光的反射,顆粒的尺寸似乎會增加,使得它們對人眼可見。
暗場觀察所需的特殊配件是暗場聚光鏡。 其特點是不讓光束從下往上穿過被檢查物體,而是改變光路,使其斜向被檢查物體偏光顯微鏡觀察方法主要有哪些,使照明光不直接進入被檢查物體。物鏡,利用被檢物體表面的反射或衍射光形成明亮的圖像。 暗場觀察的分辨率遠高于明場觀察,可達0.02-0.004
3. 相差顯微鏡(Phase PH)
在光學顯微鏡的發展過程中,相差顯微鏡的成功發明是現代顯微技術的一項重要成就。我們知道,人眼只能辨別光波的波長(顏色)和振幅(亮度)。 對于無色透明的生物標本,光線通過時,波長和振幅變化不大,在明視場觀察中很難觀察到標本。
。 相襯顯微鏡是利用被檢物體光路的差異進行顯微檢查,即有效利用光的干涉現象,將人眼無法區分的相位差轉變為可區分的幅度差,即使對于無色透明物質。 可以變得清晰可見。 這極大地方便了活細胞的觀察,因此相差顯微鏡廣泛應用于倒置顯微鏡中。
相差顯微鏡的基本原理是將可見光透過標本的光程差轉化為振幅差,從而提高各種結構之間的對比度,使各種結構清晰可見。 光線穿過標本后發生折射,偏離原來的光路,并被延遲1/4λ(波長)。 如果增加或減少1/4λ,則光程差變為1/2λ,兩束光束合并后發生干涉。 加強、增加或減少振幅、增加對比度。 從結構上來說,相差顯微鏡有兩個不同于普通光學顯微鏡的特殊之處:
1. 環形光闌 ( ) 位于光源和聚光鏡之間。 其作用是使通過聚光鏡的光線形成空心光錐并聚焦在標本上。
2、相位板( ) 在物鏡上添加了涂有氟化鎂的相位板,可以使直射光或衍射光的相位延遲1/4λ。 分為兩種:
1. A+相位板:將直射光延遲1/4λ。 兩組光波合成后,光波相加,振幅增大。 標本結構變得比周圍介質更亮,形成明亮對比度(或負對比度)。
2. B+相位板:使衍射光延遲1/4λ。 兩組光線組合后,光波相減,振幅變小,形成暗對比(或正對比),結構變得比周圍介質更暗。
4. 微分干涉顯微鏡(DIC)
微分干涉顯微鏡出??現于 20 世紀 60 年代。 它不僅可以觀察無色透明的物體,而且圖像呈現出強烈的立體浮雕感。 它還具有相差顯微鏡無法達到的某些優點,觀察效果更好。 逼真。
原則;
微分干涉顯微鏡使用特殊的沃拉斯頓棱鏡來分解光束。 分裂梁的振動方向相互垂直且強度相等。 光束在彼此非常接近的兩個點處穿過被檢查的物體,但相位略有不同。 由于兩束光束之間的分光距離極小,因此不會出現重影現象,使圖像呈現三維效果。
DIC顯微鏡的物理原理與相差顯微鏡完全不同,技術設計也復雜得多。 DIC使用偏振光,有四個特殊的光學元件:起偏器()、DIC棱鏡、DIC滑翔機和檢偏器()。 起偏器直接安裝在聚光系統前面,使光線發生線偏振。 羅馬斯棱鏡或 DIC 棱鏡安裝在聚光鏡中。 這種棱鏡可以將一束光分解成兩束偏振方向不同的光(x和y),并且兩者形成一個小角度。 聚光鏡使兩束光束平行于顯微鏡的光軸。 最初,兩束光具有相同的相位。 在穿過試樣的相鄰區域后,由于試樣的厚度和折射率不同,兩束光之間會產生光程差。 第二個羅馬棱鏡,即 DIC 滑翔機,安裝在物鏡的后焦平面上,它將兩種光波合二為一。
此時,兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。 最后,光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。 在光束在目鏡中形成 DIC 圖像之前,檢偏器與偏振器成直角。 分析器將兩個垂直的光波組合成具有相同偏振平面的兩束光束,使它們發生干涉。 x 波和 y 波之間的光程差決定了傳輸的光量。 當光程差為0時,沒有光通過檢偏器; 當光程差等于波長的一半時偏光顯微鏡觀察方法主要有哪些,通過的光達到最大值。 所以在灰色背景下,標本結構呈現出明暗差異。 為了達到圖像的最佳對比度,可以通過調節DIC滑塊的縱向微調來改變光程差。 光程差可以改變圖像的亮度。調節DIC滑塊可以使標本的細微結構呈現出正或負的投影圖像,通常一側亮,另一側暗。 這會產生標本的人造三維印象,類似于大理石上的浮雕。
5.偏光顯微鏡(POL)
偏光顯微鏡的特點
偏光顯微鏡是用來鑒定物質精細結構光學性質的顯微鏡。 任何具有雙折射的物質都可以在偏光顯微鏡下清晰地區分。 當然,這些物質也可以用染過的頭發觀察到,但有些是不可能的,必須使用偏光顯微鏡。
偏光顯微鏡的特點是將普通光轉變為偏振光進行顯微鏡檢查,以鑒定某種物質是單折射(各向同性)還是雙折射(各向異性)。
雙折射是晶體的基本性質。 因此,偏光顯微鏡廣泛應用于礦物、化學等領域。 它在生物學和植物學中也有應用。
6. 浮雕相差顯微鏡(RC HMC)
1975年,博士發明
2002年,專利到期,各顯微鏡制造商推出了采用RC技術的以自己命名的產品。
原則
斜光照射標本產生折射和衍射。 光線通過物鏡的光密度梯度調節器產生不同的陰影,從而在透明標本表面產生明暗差異,增加觀察對比度。
特征
提高未染色標本的可見度和對比度;
圖像顯示陰影或近似三維結構,無光暈;
可檢測雙折射材料(巖片、晶體、骨頭);
可檢測玻璃、塑料等培養皿中的細胞、器官和組織;
聚光鏡的工作距離可以設計得更長;
RC 物鏡還可用于明場、暗場和熒光觀察
7:熒光顯微鏡(FL)
熒光顯微鏡利用短波長光照射被熒光素染色的物體,使其被激發產生長波長熒光,然后進行觀察。
優勢:
? 高檢測能力(放大)
? 對細胞刺激小(可體內染色)
? 能夠進行多次染色
使用:
? 觀察物體結構——熒光素
? 比較熒光的有無和色調來識別物質 - 抗體熒光等。
? 測量熒光量以進行物質的定性和定量分析