前期小編早已報(bào)導(dǎo)邵峰組炎性介質(zhì)造成的焦亡，當(dāng)激活焦亡發(fā)生的路徑時(shí)GSDMD蛋白被切割成N殘基片斷GSDMD-NT以及炎性細(xì)胞因子如白介素1β的釋放，并且沒有明晰的表明GSDMD-NT是怎樣導(dǎo)致細(xì)胞焦亡的，這期小編就繼續(xù)介紹由波士頓醫(yī)大學(xué)研究報(bào)導(dǎo)的GSDMD-NT在細(xì)胞焦亡發(fā)生了如何的機(jī)制。如題：《-Dbypores》（回復(fù)可下載文獻(xiàn)，一周有效）
假定（一）：在細(xì)胞焦亡發(fā)生的時(shí)侯，GSDMD-NT才能在細(xì)胞膜上產(chǎn)生孔
第一：檢測(cè)GSDMD-NT能夠產(chǎn)生低聚化的小分子。在293T細(xì)胞內(nèi)過抒發(fā)Flag標(biāo)簽的GSDMD-NT和GSDMD（大鼠屬性的），通過SDS電泳凝膠剖析溶化產(chǎn)物并用Flag抗原觀察抒發(fā)情況。結(jié)果顯示GSDMD-NT在25kDa和250kDa之間徘徊，GSDMD具有單體和二聚體，表明其可以產(chǎn)生小分子的低聚物，而當(dāng)用非變型電泳凝膠觀察時(shí)，轉(zhuǎn)染Flag-GSDMD-NT的組會(huì)有高分子量低聚物出現(xiàn)。
第二：驗(yàn)證多元化GSDMD亞基在低聚物時(shí)的狀態(tài)。課題組在細(xì)胞內(nèi)分別轉(zhuǎn)染了Flag和HA標(biāo)簽的GSDMD-NT，用Flag和HA抗原做IP都還能沉淀出GSDMD-NT，表明GSDMD-NT自我關(guān)聯(lián)并可能產(chǎn)生同源低聚物；當(dāng)轉(zhuǎn)染Flag-GSDMD-NT，F(xiàn)lag-GSDMD-CT，共轉(zhuǎn)或則單轉(zhuǎn)GSDMD-CT-MYC在細(xì)胞內(nèi)時(shí)細(xì)胞膜損傷，發(fā)覺GSDMD-CT的沒有被Flag抗原共同沉淀出來，而且Flag標(biāo)記的GSDMD-NT與MYC標(biāo)記的GSDMD-CT被沉淀出來并互相關(guān)聯(lián)。
第三：已有報(bào)導(dǎo)炎性介質(zhì)導(dǎo)致細(xì)胞焦亡，這么本文就來驗(yàn)證該導(dǎo)致細(xì)胞焦亡時(shí)是否激活了GADMD的切割和低聚化。
在293T細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)染Flag-GSDMD和酶致死（C254A）的-11或則未處理的-11，然后通過測(cè)量乳酸酯化酶的釋放以及蛋白情況觀察GSDMD的低聚化。當(dāng)過抒發(fā)Flag–GSDMD和未處理的-11時(shí)，細(xì)胞有60%死亡，但是只有野生型-11處理的組形成了GSDMD-NT片斷和低聚化。同樣的結(jié)果也出現(xiàn)了在骨髓巨噬細(xì)胞細(xì)胞系中穩(wěn)定抒發(fā)Flag-GSDMD而且電轉(zhuǎn)脂寡糖（LPS）的時(shí)侯激活-11炎性焦亡通路。
假定（二）：GSDMD-NT低聚物通過產(chǎn)生細(xì)胞膜孔來殺害細(xì)胞
產(chǎn)生膜孔的蛋白一般是帶有正電荷膜插入的雙性結(jié)構(gòu)，為了驗(yàn)證潛在的功能性膜結(jié)構(gòu)域，課題組在GSDMD-NT中找尋進(jìn)化保守的，帶正電的殘基。比較和篩選六種喂奶植物的序列，并使用Omega和SOPMA兩種軟件預(yù)測(cè)這些膜結(jié)構(gòu)域，有四種出現(xiàn)。由于這四種可能存在很大的重要性，課題組將這4種序列突變，稱為4A。
為觀察那些突變是否會(huì)影響寡聚化和細(xì)胞焦亡，課題組在細(xì)胞分別抒發(fā)GSDMD，野生型或4A突變型的GSDMD-NT時(shí)，結(jié)果表明野生型的GSDMD-NT引起了寡聚化和細(xì)胞焦亡：4A突變型制止了GSDMD-NT低聚化和細(xì)胞焦亡。因而結(jié)果顯示低聚化和細(xì)胞焦亡是相關(guān)聯(lián)的，當(dāng)?shù)途刍l(fā)生的同時(shí)，細(xì)胞也發(fā)生了焦亡。
假定（三）：假如GSDMD-NT在細(xì)胞膜上產(chǎn)生了小孔，這么其應(yīng)當(dāng)在炎性激活之后定位在細(xì)胞膜上
為了剖析膜定位，課題組將細(xì)胞共轉(zhuǎn)了野生型或4A突變型Flag-GSDMD和野生型或則C254A-11，提取膜蛋白，結(jié)果發(fā)覺只有野生型-11會(huì)切割出GSDMD-NT片斷，也是僅有野生型標(biāo)記GSDMD-NT被界定為期并與細(xì)胞膜相關(guān)聯(lián)。
第一：為探求GSDMD-NT與何種細(xì)胞膜相關(guān)聯(lián)，課題組分級(jí)搜集了細(xì)胞核提取后的堿液，該細(xì)胞分別被轉(zhuǎn)染Flag–GSDMD，野生型或4A突變型Flag-GSDMD-NT抒發(fā)引物，分層次的堿液有細(xì)胞溶質(zhì)的，重膜細(xì)胞膜損傷，輕膜，不胺類細(xì)胞質(zhì)分?jǐn)?shù)，分別名為S100，p7，p20，p100。
結(jié)果顯示Flag-GSDMD-NT分布在S100和P7。細(xì)胞溶質(zhì)上包含大部份的單體的Flag–GSDMD-NT，只有膜片斷包含高分子量低聚物。
第二：由于脂類結(jié)合會(huì)影響讓蛋白通透的膜小孔的產(chǎn)生，因而課題組探求可能與GSDMD-NT結(jié)合的脂類是哪些，課題組分別孵育重組了GSDMD，GSDMD-NT，GSDMD-CT和4A突變GSDMD-NT，細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞成孔蛋白、穿孔素和粒溶化素以及不同脂肪膜。結(jié)果顯示GSDMD-NT可以與線粒體和真菌的脂類以及心磷脂緊密結(jié)合，而與質(zhì)膜上重要的磷脂酰膽堿（PC）與磷脂酰乙酸胺(PE)不結(jié)合。而心磷脂在線粒體的內(nèi)膜上是不能運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)中的。
這個(gè)脂類結(jié)合模式表明GSDMD-NT可能選擇性地與質(zhì)膜的內(nèi)膜以及與真菌的膜結(jié)合。而外葉上的內(nèi)體和吞噬小體包含著與內(nèi)葉同樣的磷脂，表明GSDMD-NT可能也與那些相結(jié)合。
假定（四）：細(xì)胞焦亡時(shí)GSDMD-NT產(chǎn)生低聚物而且與PS質(zhì)膜相關(guān)
第一：課題組接出來借助電子顯微鏡觀察GSDMD-NT低聚物與PS質(zhì)膜間的關(guān)系，將PS脂類體與DSDMD在細(xì)胞內(nèi)孵育，以及PS脂類體與DSDMD和-11共同孵育，結(jié)果表明富含-11細(xì)胞膜發(fā)生斷裂，而僅富含DSDMD的沒有膜斷裂的現(xiàn)象。
第二：焦亡的細(xì)胞就會(huì)釋放細(xì)胞因子的成份到周圍環(huán)境中，所以課題組觀察了過抒發(fā)Flag–GSDMD-NT后，會(huì)不會(huì)釋放GSDMD-NT到培養(yǎng)基中。結(jié)果顯示Flag–GSDMD只在細(xì)胞中高抒發(fā)，而Flag–GSDMD-NT在堿液中抒發(fā)。
為了測(cè)量釋放的GSDMD-NT的活性，課題組將濾液裝入iBMDM細(xì)胞中孵育，結(jié)果顯示沒有細(xì)胞發(fā)生焦亡，而且用自噬染色進(jìn)一步得到了同樣的結(jié)果驗(yàn)證。那些證據(jù)表明GSDMD-NT不會(huì)從細(xì)胞膜外破壞細(xì)胞的活性，因而其只會(huì)與細(xì)胞膜的內(nèi)葉上的脂類相結(jié)合，進(jìn)而影響細(xì)胞的活性。
以上便是波士頓醫(yī)大學(xué)關(guān)于細(xì)胞膜實(shí)驗(yàn)的主要部份，怎樣樣？有沒有學(xué)到細(xì)胞膜實(shí)驗(yàn)的真諦，是不是感嘆于美國(guó)實(shí)驗(yàn)室對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的精細(xì)處理。
因此小編這期就細(xì)胞膜知識(shí)給你們做一點(diǎn)點(diǎn)的普及：
細(xì)胞膜的物理組成：主要組成成分是膜脂、膜蛋白質(zhì)、膜糖。其中膜脂是構(gòu)成細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)骨架，而膜蛋白質(zhì)則以多種方式與脂分子單層結(jié)合，膜脂類則覆蓋在細(xì)胞膜的表面。
細(xì)胞膜的生物學(xué)特點(diǎn)：細(xì)胞膜的不對(duì)稱性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、膜蛋白的運(yùn)動(dòng)性。其中細(xì)胞膜的不對(duì)稱性決定膜功能的方向性，而細(xì)胞膜的流動(dòng)性是膜功能的保證，膜蛋白則可以進(jìn)行側(cè)向擴(kuò)散，翻轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)等運(yùn)動(dòng)。
細(xì)胞膜的分子結(jié)構(gòu)模型：具有四個(gè)分子結(jié)構(gòu)模型，片層模型；單位膜模型；流動(dòng)鑲嵌模型；脂筏模型。
細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能：脂類單層的結(jié)構(gòu)是以脂類雙分子層為細(xì)胞膜基本骨架并呈液態(tài)模式，在其中鑲嵌有不同功能的晶態(tài)蛋白質(zhì)。具有以下幾個(gè)功能，如屏障保護(hù)，物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，激動(dòng)，辨識(shí)與通信，免疫，收縮和繁育。
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