簡介
原理
補體依賴細胞毒實驗的基本原理是細胞性抗體與特異性抗原（IgG1,2,3或IgM）結合激活補體活化的精典途徑細胞膜損傷，補體活化形成的攻膜復合體可導致細胞膜損傷，損傷細胞膜私密性改變，而使細胞外低滲的液體步入細胞，造成細胞水腫死亡，可以通過顯微鏡計數死細胞的多少，來判定補體依賴的細胞毒活性。
用途
補體依賴細胞毒實驗可用于該實驗可拿來測量細胞表面特異性的抗體，也可用于測量制備的抗原是否具有細胞毒性（并非所有抗原與抗體結合后都能激活補體，尤其是單克隆抗原）、淋巴細胞亞群的鑒別、組織相容性抗體的檢測與分型、選擇性除去某一細胞亞群、單克隆抗原的篩選與鑒別。
材料與儀器
器材：解剖器材、平皿、試管、滴管、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、水浴箱。
試劑：
①補體：新鮮家兔混和血漿，分裝后保存于-20℃，用時以Hanks液進行適當稀釋；
②抗Thy-1血漿、PBS、0.5%錐蟲亂菊液;
步驟
補體依賴細胞毒實驗（以抗Thy-1血漿與大鼠的胸腺或脾T淋巴細胞互相作用，通過激活補體對胸腺或脾的T細胞進行殺傷為示例）的基本過程可分為如下幾步：
（一）靶細胞的制備
A.大鼠骨折處決細胞膜損傷，取出肝臟和胸腺（分別坐落右邊頭部和肋骨柄后）分別放在富含3mlPBS平皿中，將3-4層紗布覆蓋到組織上，用直頭鉗子固定組織，用管件鉗子輕壓組織，將其碾磨成單細胞懸液，之后用滴管隔著紗布將細胞懸液吸出，調細胞含量至5x106/ml。
注意事項：鼠處決要迅速、徹底，避免流血過多，不利于胸腺的分離，亦可事先摘眼珠放血。
（二）加樣
A.分別向陰性管中加入100μl靶細胞＋100μl抗Thy-1的McAb，陽性對照管則加入100μl靶細胞＋100μlPBS，同時向各管中各加入100μl補體。輕輕振蕩混勻后，置37℃水浴中孵育40分鐘。
注意事項：靶細胞須要新鮮分離獲得，否則長時間放置可引起細胞自然死亡而影響結果；靶細胞含量要適中，過低或過高均會影響實驗結果。補體要新鮮采集，需三只以上的家兔的血漿混和。
（三）觀察
A.細胞孵育后，取出試管，于每管中各加入50μl錐蟲亂菊液，振搖混勻后立刻取出染色的細胞懸液滴1滴到玻片上，用蓋玻片蓋上，在顯微鏡下觀察。
錐蟲藍拒染法測量細胞活力具體方式：取一定量細胞懸液離心1000r/min，5分鐘，棄上清，沉淀細胞用PBS或無血漿培養基重懸后，與適量0.5％錐蟲藍染色液混和，溫度下孵育3分鐘。于3～5分鐘內，將混和液滴于計數板上置顯微鏡下觀察計數，分別計數未著色細胞（活細胞）和著色細胞（死細胞）。根據下邊公式估算細胞活力：
注意事項：錐蟲藍染色時間及計數時間不要太長，因錐蟲藍本身具有一定的毒性作用，可致細胞死亡。
（四）結果判斷
按下式估算細胞毒百分比：
注意事項
1.大鼠處決要迅速、徹底，避免流血過多，不利于胸腺的分離，亦可事先摘眼珠放血。
2.靶細胞須要新鮮分離獲得，否則長時間放置可引起細胞自然死亡而影響結果。
3.靶細胞含量要適中，過低或過高均會影響實驗結果。
4.補體要新鮮采集，需三只以上的家兔的血漿混和。
5.錐蟲藍染色時間及計數時間不要太長，因錐蟲藍本身具有一定的毒性作用，可致細胞死亡。