1.本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)提取試劑領(lǐng)域，具體涉及一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式。
背景技術(shù)：
2.蛋白質(zhì)組學(xué)研究才能通過建立細(xì)胞中蛋白質(zhì)抒發(fā)的時(shí)間及空間差別圖譜闡明生命規(guī)律，蛋白質(zhì)的sds聚丙烯丙酯凝膠電泳分離技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù)，而對蛋白組學(xué)差別剖析的關(guān)鍵技術(shù)是總蛋白是否完全提取，在總蛋白的提取上，細(xì)胞裂解液是廣泛使用在蛋白剖析和測量上的一種試劑，因裂解細(xì)胞或組織的硬度而被分為強(qiáng)、中、弱三種，分別用于不同的使用中，但是這三種細(xì)胞組織裂解液均不能否完全提取出細(xì)胞或組織中的全蛋白，由于其條件的限制，常常會出現(xiàn)細(xì)胞沉淀或大量不溶于裂解液中的脂蛋白等；
3.近些年來，蛋白提取越來越專業(yè)化，如細(xì)胞核蛋白提取、細(xì)胞膜蛋白提取、細(xì)胞漿蛋白提取和線粒體蛋白提取等，分別用于不同的科研領(lǐng)域，而且這種技術(shù)依然存在不能否完全提取出總蛋白的缺點(diǎn)；
4.ripa提取總蛋白的方式以價(jià)錢低廉、操作簡單及重復(fù)性較好等特征被廣泛應(yīng)用在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，廣泛采用的試劑有十二羥基磺酸鈉、二乙基亞砜、曲拉通等，還能起到裂解細(xì)胞推動蛋白質(zhì)溶化，避免細(xì)胞裂解液中蛋白質(zhì)降解等作用，大大提升了細(xì)胞或組織中全蛋白的提取，然而，在蛋白提取前處理步驟較為繁雜，大大降低了操作時(shí)間，降低了組織或細(xì)胞被污染的幾率。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
5.本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有的在蛋白提取前處理步驟較為繁雜，大大降低了操作時(shí)間，降低了組織或細(xì)胞被污染的機(jī)率，本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)提取試劑，本發(fā)明還提供一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，本發(fā)明還提供一種蛋白質(zhì)提取方式，才能不須要提取前對細(xì)胞或組織進(jìn)行前處理，才能減短提取組織或細(xì)胞中全蛋白的時(shí)間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強(qiáng)細(xì)胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時(shí)間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時(shí)間內(nèi)的到細(xì)胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細(xì)胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細(xì)胞中抒發(fā)量較低的蛋白，用以解決現(xiàn)有技術(shù)造成的缺陷。
6.為解決上述技術(shù)問題本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案：
7.第一方面，一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，包含尿素、十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四羧酸、二乙基亞砜。
8.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，所述尿素的質(zhì)量容積比為40g/l；
9.所述十二羥基氯化鈉的質(zhì)量容積比為1g/l；
10.所述聚乙二醇辛基甲基醚的容積百分濃度為0.1％；
11.所述氟化鈉的質(zhì)量容積比為8g/l；
12.所述硝酸鉀的質(zhì)量容積比為0.2g/l；
13.所述乙酸氫二鈉的質(zhì)量容積比為1.42g/l；
14.所述乙酸二氫鉀的質(zhì)量容積比為0.27g/l；
15.所述乙二胺四羧酸的質(zhì)量容積比為8g/l；
16.所述二乙基亞砜的容積百分濃度為1％。
17.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，還包含濃硫酸，采用所述濃硫酸將所述蛋白質(zhì)提取試劑的ph值調(diào)至7.0
?
7.5。
18.第二方面，一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其中，包含以下步驟：
19.步驟a1：將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底；
20.步驟a2：加入40g尿素溶化；
21.步驟a3：依次加入十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑。
22.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其中，在所述步驟a3得到的所述蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進(jìn)行過濾抑菌。
23.第三方面，一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，包含以下步驟：
24.步驟b1：獲取組織，并將所述組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液；
25.步驟b2：以100mg的組織或細(xì)胞配1ml的蛋白質(zhì)提取試劑的比列加入離心管中，并加入碾磨瓷珠放在組織勻漿器中碾磨；
26.步驟b3：碾磨完成后在冰上靜置5min，此后離心獲得總蛋白溶化上清。
27.上述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，步驟b2中需加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min。
28.上述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，步驟b3中所述離心的條件為下離心5min。
29.第四方面，采用第一方面提供的一種蛋白質(zhì)提取試劑在蛋白聚丙烯丙酯凝膠電泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的應(yīng)用。
30.根據(jù)上述本發(fā)明一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式提供的技術(shù)方案具有以下技術(shù)療效：
31.本發(fā)明提供的一種蛋白提取試劑不須要提取前對細(xì)胞或組織進(jìn)行前處理，才能減短提取組織或細(xì)胞中全蛋白的時(shí)間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強(qiáng)細(xì)胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；
32.根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時(shí)間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時(shí)間內(nèi)的到細(xì)胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細(xì)胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜細(xì)胞膜蛋白，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細(xì)胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
附圖說明
33.圖1為各個(gè)樣品的wb測量且測量指標(biāo)為gapdh的結(jié)果圖；
34.圖2為各個(gè)樣品的wb測量且測量指標(biāo)為β
?
actin的結(jié)果圖。
具體施行方法
35.為了使發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)造特點(diǎn)、達(dá)成目的和功效便于明白了解，下結(jié)合具體圖示，對本發(fā)明施行例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，其實(shí)，所描述的施行例是本發(fā)明的一部份施行例，而不是全部的施行例。
36.基于本發(fā)明中的施行例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的所有其他施行例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
37.須知，本說明書所附隱喻所繪示的結(jié)構(gòu)、比例、大小等，均僅用以配合說明書所闡明的內(nèi)容，以供熟悉此技術(shù)的人士了解與閱讀，并非用以限定本發(fā)明可施行的限定條件，故不具技術(shù)上的實(shí)質(zhì)意義，任何結(jié)構(gòu)的修飾、比例關(guān)系的改變或大小的調(diào)整，在不影響本發(fā)明所能形成的功效及所能達(dá)成的目的下，均應(yīng)仍落在本發(fā)明所闡明的技術(shù)內(nèi)容得能囊括的范圍內(nèi)。
38.同時(shí)，本說明書中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中間”及“一”等的用語，亦僅為易于表述的明了，而非用以限定本發(fā)明可施行的范圍，其相對關(guān)系的改變或調(diào)整，在無實(shí)質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可施行的范疇。
39.本發(fā)明的一較佳施行例是提供一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，目的是不須要提取前對細(xì)胞或組織進(jìn)行前處理，才能減短提取組織或細(xì)胞中全蛋白的時(shí)間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強(qiáng)細(xì)胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；依據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時(shí)間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時(shí)間內(nèi)的到細(xì)胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細(xì)胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不增加蛋白活性并提取到組織或細(xì)胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
40.制備蛋白質(zhì)提取試劑，將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底獲得質(zhì)量容積比為8g/l的堿液，隨即加入40g的尿素溶化，此后依次加入質(zhì)量容積比為1g/l的十二羥基氯化鈉、體積百分濃度為0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、質(zhì)量容積比為8g/l的硫酸鈉、質(zhì)量容積比為0.2g/l的硝酸鉀、質(zhì)量容積比為1.42g/l的乙酸氫二鈉、0.27g/l的乙酸二氫鉀、體積百分濃度為1％的二酰基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑；
41.隨即在蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進(jìn)行過濾抑菌；
42.獲取組織，采用小鼠腎臟330mg，分為a組、b組、c組、d組，每組組織采用50mg的小鼠腎臟，并將a組、b組、c組、d組中的組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液，a組組織中使用進(jìn)行操作、b組使用進(jìn)行操作、c組使用進(jìn)行操作并加入苯氨基磺酰氟、d組使用進(jìn)行操作并加入苯氨基磺酰氟；
43.a組、b組、c組、d組分別配0.5ml的蛋白質(zhì)提取試劑并加入離心管中，隨即加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min；
44.碾磨完成后在冰上靜置5min，此后在的條件下離心5min獲得a組、b組、c組、d組的總蛋白溶化上清。
45.獲取的a組、b組、c組、d組總蛋白溶化上清進(jìn)行wb測量，測量指標(biāo)為gapdh(甘油醛
?3?
乙酸酯化酶)和β
?
actin(肌動蛋白)，結(jié)果如圖1
?
2所示。
46.綜上，本發(fā)明的一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，才能不須要提取前對細(xì)胞或組織進(jìn)行前處理，才能減短提取組織或細(xì)胞中全蛋白的時(shí)間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強(qiáng)細(xì)胞和組織中總蛋白的提取效率細(xì)胞膜蛋白，且成本較為低廉；根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時(shí)間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時(shí)間內(nèi)的到細(xì)胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細(xì)胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細(xì)胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
47.以上對發(fā)明的具體施行例進(jìn)行了描述。須要理解的是，發(fā)明并不局限于上述特定施行方法，其中未盡詳盡描述的設(shè)備和結(jié)構(gòu)應(yīng)當(dāng)理解為用本領(lǐng)域中的普通形式給以施行；本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)力要求的范圍內(nèi)作出各類變型或更改作出若干簡單推演、變形或替換，這并不影響發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。
技術(shù)特點(diǎn)：
1.一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點(diǎn)在于，包含尿素、十二羰基氯化鈉、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四羧酸、二乙基亞砜。2.如權(quán)力要求1所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點(diǎn)在于，所述尿素的質(zhì)量容積比為40g/l；所述十二羥基氯化鈉的質(zhì)量容積比為1g/l；所述聚乙二醇辛基氰基醚的容積百分濃度為0.1％；所述硝酸鈉的質(zhì)量容積比為8g/l；所述硝酸鉀的質(zhì)量容積比為0.2g/l；所述乙酸氫二鈉的質(zhì)量容積比為1.42g/l；所述乙酸二氫鉀的質(zhì)量容積比為0.27g/l；所述乙二胺四羧酸的質(zhì)量容積比為8g/l；所述二乙基亞砜的容積百分濃度為1％。3.如權(quán)力要求2所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點(diǎn)在于，還包含濃硫酸，采用所述濃硫酸將所述蛋白質(zhì)提取試劑的ph值調(diào)至7.0
?
7.5。4.一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其特點(diǎn)在于，包含以下步驟：步驟a1：將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底；步驟a2：加入40g尿素溶化；步驟a3：依次加入十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑。5.如權(quán)力要求4所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其特點(diǎn)在于，在所述步驟a3得到的所述蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進(jìn)行過濾抑菌。6.一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點(diǎn)在于，包含以下步驟：步驟b1：獲取組織，并將所述組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液；步驟b2：以100mg的組織或細(xì)胞配1ml的蛋白質(zhì)提取試劑的比列加入離心管中，并加入碾磨瓷珠放在組織勻漿器中碾磨；步驟b3：碾磨完成后在冰上靜置5min，此后離心獲得總蛋白溶化上清。7.如權(quán)力要求6所述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點(diǎn)在于，步驟b2中需加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min。8.如權(quán)力要求7所述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點(diǎn)在于，步驟b3中所述離心的條件為下離心5min。9.如權(quán)力要求1
?
3任一項(xiàng)所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑在蛋白聚丙烯丙酯凝膠電泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的應(yīng)用。
技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，蛋白質(zhì)提取試劑包含質(zhì)量容積比為40g/L的尿素、質(zhì)量容積比為1g/L的十二羰基氯化鈉、體積百分濃度為0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、質(zhì)量容積比為8g/L的硫酸鈉、質(zhì)量容積比為0.2g/L的硝酸鉀、質(zhì)量容積比為1.42g/L的乙酸氫二鈉、質(zhì)量容積比為0.27g/L的乙酸二氫鉀、質(zhì)量容積比為8g/L的乙二胺四羧酸、體積百分濃度為1％的二酰基亞砜；制備方式包含將乙二胺四羧酸粉末溶化于800mL去離子水后加40g尿素溶化，加十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜溶化定容至1升制得蛋白質(zhì)提取試劑。提取試劑。提取試劑。
技術(shù)研制人員：張煜
受保護(hù)的技術(shù)使用者：百美特（北京）生物科技有限公司
技術(shù)研制日：2021.06.19
技術(shù)公布日：2021/11/8