1.本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)提取試劑領(lǐng)域，具體涉及一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式。
背景技術(shù)：
2.蛋白質(zhì)組學(xué)研究才能通過建立細胞中蛋白質(zhì)抒發(fā)的時間及空間差別圖譜闡明生命規(guī)律，蛋白質(zhì)的sds聚丙烯丙酯凝膠電泳分離技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù)，而對蛋白組學(xué)差別剖析的關(guān)鍵技術(shù)是總蛋白是否完全提取，在總蛋白的提取上，細胞裂解液是廣泛使用在蛋白剖析和測量上的一種試劑，因裂解細胞或組織的硬度而被分為強、中、弱三種，分別用于不同的使用中，但是這三種細胞組織裂解液均不能否完全提取出細胞或組織中的全蛋白，由于其條件的限制，常常會出現(xiàn)細胞沉淀或大量不溶于裂解液中的脂蛋白等；
3.近些年來，蛋白提取越來越專業(yè)化，如細胞核蛋白提取、細胞膜蛋白提取、細胞漿蛋白提取和線粒體蛋白提取等，分別用于不同的科研領(lǐng)域，而且這種技術(shù)依然存在不能否完全提取出總蛋白的缺點；
4.ripa提取總蛋白的方式以價錢低廉、操作簡單及重復(fù)性較好等特征被廣泛應(yīng)用在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，廣泛采用的試劑有十二羥基磺酸鈉、二乙基亞砜、曲拉通等，還能起到裂解細胞推動蛋白質(zhì)溶化，避免細胞裂解液中蛋白質(zhì)降解等作用，大大提升了細胞或組織中全蛋白的提取，然而，在蛋白提取前處理步驟較為繁雜，大大降低了操作時間，降低了組織或細胞被污染的幾率。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
5.本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有的在蛋白提取前處理步驟較為繁雜，大大降低了操作時間，降低了組織或細胞被污染的機率，本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)提取試劑，本發(fā)明還提供一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，本發(fā)明還提供一種蛋白質(zhì)提取方式，才能不須要提取前對細胞或組織進行前處理，才能減短提取組織或細胞中全蛋白的時間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強細胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時間內(nèi)的到細胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細胞中抒發(fā)量較低的蛋白，用以解決現(xiàn)有技術(shù)造成的缺陷。
6.為解決上述技術(shù)問題本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案：
7.第一方面，一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，包含尿素、十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四羧酸、二乙基亞砜。
8.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，所述尿素的質(zhì)量容積比為40g/l；
9.所述十二羥基氯化鈉的質(zhì)量容積比為1g/l；
10.所述聚乙二醇辛基甲基醚的容積百分濃度為0.1％；
11.所述氟化鈉的質(zhì)量容積比為8g/l；
12.所述硝酸鉀的質(zhì)量容積比為0.2g/l；
13.所述乙酸氫二鈉的質(zhì)量容積比為1.42g/l；
14.所述乙酸二氫鉀的質(zhì)量容積比為0.27g/l；
15.所述乙二胺四羧酸的質(zhì)量容積比為8g/l；
16.所述二乙基亞砜的容積百分濃度為1％。
17.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其中，還包含濃硫酸，采用所述濃硫酸將所述蛋白質(zhì)提取試劑的ph值調(diào)至7.0
?
7.5。
18.第二方面，一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其中，包含以下步驟：
19.步驟a1：將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底；
20.步驟a2：加入40g尿素溶化；
21.步驟a3：依次加入十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑。
22.上述的一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其中，在所述步驟a3得到的所述蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進行過濾抑菌。
23.第三方面，一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，包含以下步驟：
24.步驟b1：獲取組織，并將所述組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液；
25.步驟b2：以100mg的組織或細胞配1ml的蛋白質(zhì)提取試劑的比列加入離心管中，并加入碾磨瓷珠放在組織勻漿器中碾磨；
26.步驟b3：碾磨完成后在冰上靜置5min，此后離心獲得總蛋白溶化上清。
27.上述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，步驟b2中需加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min。
28.上述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其中，步驟b3中所述離心的條件為下離心5min。
29.第四方面，采用第一方面提供的一種蛋白質(zhì)提取試劑在蛋白聚丙烯丙酯凝膠電泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的應(yīng)用。
30.根據(jù)上述本發(fā)明一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式提供的技術(shù)方案具有以下技術(shù)療效：
31.本發(fā)明提供的一種蛋白提取試劑不須要提取前對細胞或組織進行前處理，才能減短提取組織或細胞中全蛋白的時間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強細胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；
32.根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時間內(nèi)的到細胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜細胞膜蛋白，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
附圖說明
33.圖1為各個樣品的wb測量且測量指標(biāo)為gapdh的結(jié)果圖；
34.圖2為各個樣品的wb測量且測量指標(biāo)為β
?
actin的結(jié)果圖。
具體施行方法
35.為了使發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)造特點、達成目的和功效便于明白了解，下結(jié)合具體圖示，對本發(fā)明施行例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，其實，所描述的施行例是本發(fā)明的一部份施行例，而不是全部的施行例。
36.基于本發(fā)明中的施行例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的所有其他施行例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
37.須知，本說明書所附隱喻所繪示的結(jié)構(gòu)、比例、大小等，均僅用以配合說明書所闡明的內(nèi)容，以供熟悉此技術(shù)的人士了解與閱讀，并非用以限定本發(fā)明可施行的限定條件，故不具技術(shù)上的實質(zhì)意義，任何結(jié)構(gòu)的修飾、比例關(guān)系的改變或大小的調(diào)整，在不影響本發(fā)明所能形成的功效及所能達成的目的下，均應(yīng)仍落在本發(fā)明所闡明的技術(shù)內(nèi)容得能囊括的范圍內(nèi)。
38.同時，本說明書中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中間”及“一”等的用語，亦僅為易于表述的明了，而非用以限定本發(fā)明可施行的范圍，其相對關(guān)系的改變或調(diào)整，在無實質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可施行的范疇。
39.本發(fā)明的一較佳施行例是提供一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，目的是不須要提取前對細胞或組織進行前處理，才能減短提取組織或細胞中全蛋白的時間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強細胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；依據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時間內(nèi)的到細胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不增加蛋白活性并提取到組織或細胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
40.制備蛋白質(zhì)提取試劑，將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底獲得質(zhì)量容積比為8g/l的堿液，隨即加入40g的尿素溶化，此后依次加入質(zhì)量容積比為1g/l的十二羥基氯化鈉、體積百分濃度為0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、質(zhì)量容積比為8g/l的硫酸鈉、質(zhì)量容積比為0.2g/l的硝酸鉀、質(zhì)量容積比為1.42g/l的乙酸氫二鈉、0.27g/l的乙酸二氫鉀、體積百分濃度為1％的二酰基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑；
41.隨即在蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進行過濾抑菌；
42.獲取組織，采用小鼠腎臟330mg，分為a組、b組、c組、d組，每組組織采用50mg的小鼠腎臟，并將a組、b組、c組、d組中的組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液，a組組織中使用進行操作、b組使用進行操作、c組使用進行操作并加入苯氨基磺酰氟、d組使用進行操作并加入苯氨基磺酰氟；
43.a組、b組、c組、d組分別配0.5ml的蛋白質(zhì)提取試劑并加入離心管中，隨即加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min；
44.碾磨完成后在冰上靜置5min，此后在的條件下離心5min獲得a組、b組、c組、d組的總蛋白溶化上清。
45.獲取的a組、b組、c組、d組總蛋白溶化上清進行wb測量，測量指標(biāo)為gapdh(甘油醛
?3?
乙酸酯化酶)和β
?
actin(肌動蛋白)，結(jié)果如圖1
?
2所示。
46.綜上，本發(fā)明的一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，才能不須要提取前對細胞或組織進行前處理，才能減短提取組織或細胞中全蛋白的時間，極大的降低了蛋白質(zhì)樣本被污染的可能，就能大大的增強細胞和組織中總蛋白的提取效率細胞膜蛋白，且成本較為低廉；根據(jù)一種蛋白提取試劑的使用方式進行蛋白質(zhì)的提取才能在極短的時間內(nèi)完成蛋白的提取，并在短時間內(nèi)的到細胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解細胞和組織推動蛋白質(zhì)溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亞砜，有助于抑制蛋白質(zhì)降解，才能而不減少蛋白活性并提取到組織或細胞中抒發(fā)量較低的蛋白。
47.以上對發(fā)明的具體施行例進行了描述。須要理解的是，發(fā)明并不局限于上述特定施行方法，其中未盡詳盡描述的設(shè)備和結(jié)構(gòu)應(yīng)當(dāng)理解為用本領(lǐng)域中的普通形式給以施行；本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)力要求的范圍內(nèi)作出各類變型或更改作出若干簡單推演、變形或替換，這并不影響發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。
技術(shù)特點：
1.一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點在于，包含尿素、十二羰基氯化鈉、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四羧酸、二乙基亞砜。2.如權(quán)力要求1所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點在于，所述尿素的質(zhì)量容積比為40g/l；所述十二羥基氯化鈉的質(zhì)量容積比為1g/l；所述聚乙二醇辛基氰基醚的容積百分濃度為0.1％；所述硝酸鈉的質(zhì)量容積比為8g/l；所述硝酸鉀的質(zhì)量容積比為0.2g/l；所述乙酸氫二鈉的質(zhì)量容積比為1.42g/l；所述乙酸二氫鉀的質(zhì)量容積比為0.27g/l；所述乙二胺四羧酸的質(zhì)量容積比為8g/l；所述二乙基亞砜的容積百分濃度為1％。3.如權(quán)力要求2所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特點在于，還包含濃硫酸，采用所述濃硫酸將所述蛋白質(zhì)提取試劑的ph值調(diào)至7.0
?
7.5。4.一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其特點在于，包含以下步驟：步驟a1：將乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去離子水底；步驟a2：加入40g尿素溶化；步驟a3：依次加入十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜后溶化并定容至制得蛋白質(zhì)提取試劑。5.如權(quán)力要求4所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方式，其特點在于，在所述步驟a3得到的所述蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃硫酸將ph值調(diào)至7.0
?
7.5，此后加去離子水定容至1l，在使用0.2μm的濾器進行過濾抑菌。6.一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點在于，包含以下步驟：步驟b1：獲取組織，并將所述組織放在乙酸緩沖鹽氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培養(yǎng)液；步驟b2：以100mg的組織或細胞配1ml的蛋白質(zhì)提取試劑的比列加入離心管中，并加入碾磨瓷珠放在組織勻漿器中碾磨；步驟b3：碾磨完成后在冰上靜置5min，此后離心獲得總蛋白溶化上清。7.如權(quán)力要求6所述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點在于，步驟b2中需加入3
?
7顆的碾磨瓷珠放在組織勻漿器中以氣溫為4℃的條件下碾磨2min。8.如權(quán)力要求7所述的一種蛋白質(zhì)提取方式，其特點在于，步驟b3中所述離心的條件為下離心5min。9.如權(quán)力要求1
?
3任一項所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑在蛋白聚丙烯丙酯凝膠電泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的應(yīng)用。
技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方式以及蛋白質(zhì)提取方式，蛋白質(zhì)提取試劑包含質(zhì)量容積比為40g/L的尿素、質(zhì)量容積比為1g/L的十二羰基氯化鈉、體積百分濃度為0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、質(zhì)量容積比為8g/L的硫酸鈉、質(zhì)量容積比為0.2g/L的硝酸鉀、質(zhì)量容積比為1.42g/L的乙酸氫二鈉、質(zhì)量容積比為0.27g/L的乙酸二氫鉀、質(zhì)量容積比為8g/L的乙二胺四羧酸、體積百分濃度為1％的二酰基亞砜；制備方式包含將乙二胺四羧酸粉末溶化于800mL去離子水后加40g尿素溶化，加十二羥基氯化鈉、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二乙基亞砜溶化定容至1升制得蛋白質(zhì)提取試劑。提取試劑。提取試劑。
技術(shù)研制人員：張煜
受保護的技術(shù)使用者：百美特（北京）生物科技有限公司
技術(shù)研制日：2021.06.19
技術(shù)公布日：2021/11/8