主要用途
細(xì)胞膜流動(dòng)性（）PDA螢光檢查試劑是一種致力通過(guò)二惡英癸酸螢光顏料，選擇性地與細(xì)胞膜整合，
并與之形成空間交互作用，產(chǎn)生激基締合物，其螢光充溢波長(zhǎng)的轉(zhuǎn)移，即螢光比值的提高或減緩，來(lái)剖析
膜流動(dòng)性的而精典的技術(shù)方式。該技術(shù)經(jīng)過(guò)悉心研發(fā)、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各類人體或植物貼
壁或漂浮細(xì)胞膜流動(dòng)性的動(dòng)力學(xué)檢查。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，活體檢查，操作簡(jiǎn)易細(xì)胞膜流動(dòng)性，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)微管以及微絲的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)和微泡和囊泡內(nèi)脂類的流動(dòng)動(dòng)力學(xué)，即流變學(xué)（）細(xì)
胞功能，遭到細(xì)胞膜流動(dòng)性（）或黏性（）調(diào)節(jié)，包括細(xì)胞膜酶系的活化，微管和微絲的特
定裝配或流動(dòng)，物理逼迫物受體親和力的加強(qiáng)，膜結(jié)構(gòu)和功能的作用等。一旦調(diào)節(jié)失衡，會(huì)造成病理演化
或膜性變異。二惡英癸酸（acid；PDA）為多環(huán)芳香烴（）化
合物，一種親脂性二惡英螢光探針顏料，用于膜生物化學(xué)學(xué)研究：第一，具有親脂性；第二，與細(xì)胞膜脂
質(zhì)具有類似性（），可以與細(xì)胞膜整合；第三，步入膜結(jié)構(gòu)空間后，與之形成交互作用，產(chǎn)生激基締
合物（），其螢光充溢波長(zhǎng)由372nm轉(zhuǎn)移到470nm，通過(guò)締合物和單體的螢光比值（ratio），剖析膜流
動(dòng)性強(qiáng)弱，包括動(dòng)力學(xué)，影響因子等。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液（A）
下挫
稀釋液（B）
毫升
清除液（C）
毫升
加強(qiáng)液（D）
下挫
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
1份
保存方法
保存清除液（C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（A）防止光照；有
效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液（12024）：用于細(xì)胞脫離操作
細(xì)胞培養(yǎng)液（12052）：用于細(xì)胞開(kāi)裂操作
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
培養(yǎng)箱：用于染色孵育
（共聚焦）螢光顯微鏡：用于螢光定性剖析
比色皿或白色96孔板：用于螢光定量剖析的容器螢光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀：用于螢光定量剖析
細(xì)胞流式儀：用于螢光剖析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（A）置入冰槽里熔化，稀釋液（B）
和加強(qiáng)液（D）放進(jìn)25℃恒溫水槽里預(yù)熱。之后分別移出xx下挫染色液（A）和xx下挫
加強(qiáng)液（D）到新的1.5毫升離心管，加入980下挫稀釋液（B），混勻后，在冰槽里靜置
（共5次操作量），并標(biāo)記為染色工作液，置于暗室里。之后進(jìn)行下述操作。
一、直接法
1．打算1個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞，每孔布滿率達(dá)70％（約1X105細(xì)胞數(shù)）
2．當(dāng)心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3．輕輕順著孔壁加入xx下挫清除液（C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4．當(dāng)心抽去清除液（C）
5．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強(qiáng)液（D）的染色工作液，
覆蓋培養(yǎng)孔表面
6．放進(jìn)25℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
7．當(dāng)心抽去染色工作液
8．當(dāng)心加入xx下挫清除液（C）
9．當(dāng)心抽去清除液（C）
10．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8至9一次
11．當(dāng)心加入xx下挫清除液（C）
12．選擇下述檢查：
一、即刻在倒置螢光顯微鏡下進(jìn)行觀察
1）單體螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)370nm，干涉混頻器405nm波長(zhǎng)）――
可見(jiàn)淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動(dòng)性減小
2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)470nm）――可見(jiàn)
深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動(dòng)性減小
二、即刻在螢光酶標(biāo)儀測(cè)量（迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)370nm和470nm）：獲得相對(duì)螢光單位
（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動(dòng)性強(qiáng)
二、間接法
1．打算1個(gè)12孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞，每孔布滿率達(dá)70％（約2X106細(xì)胞數(shù)）
2．當(dāng)心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3．加入xx毫升清除液（C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4．當(dāng)心抽去xx毫升清除液（C）
5．加入500下挫用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液，布滿整個(gè)培養(yǎng)孔表面
6．置入37℃培養(yǎng)箱1分種
7．輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，使細(xì)胞開(kāi)裂，之后加入1毫升用戶自備的細(xì)胞培養(yǎng)液
8．移入1.5毫升離心管（注意：漂浮細(xì)胞從這一步開(kāi)始）
23
9．放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速率為1000g
10．當(dāng)心抽去堿液
11．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強(qiáng)液（D）的染色工作液
12．用200下挫槍身上下輕盈抽吸，混勻細(xì)胞顆粒群
13．放進(jìn)25℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
14．放進(jìn)微型臺(tái)式微型離心機(jī)離心5分鐘，速率為1000g
15．當(dāng)心抽去堿液
16．加入xx下挫清除液（C），混勻細(xì)胞顆粒群
17．放進(jìn)微型臺(tái)式微型離心機(jī)離心5分鐘，速率為1000g
18．當(dāng)心抽去堿液
19．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟16至18一次
20．加入xx下挫清除液（C），混勻細(xì)胞顆粒群
21．進(jìn)行下述檢查
選擇一、（共聚焦）螢光顯微鏡觀察
1．混勻后，移出50下挫在載玻片上
2．即刻進(jìn)行載玻片壓片，在螢光顯微鏡下進(jìn)行觀察：
1）單體螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)370nm，干涉混頻器405nm波長(zhǎng)）――
可見(jiàn)淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動(dòng)性減小
2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)470nm）――可見(jiàn)
深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動(dòng)性減小
選擇二、細(xì)胞流式儀剖析
1.混勻后，即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀剖析：觀察5000個(gè)細(xì)胞以上
迸發(fā)波長(zhǎng)
360nm
螢光顏色
黑色
充溢波長(zhǎng)
單體波長(zhǎng)400nm和締合物波長(zhǎng)450nm
（70nm波寬）
螢光變化
構(gòu)建象限圖/散點(diǎn)圖
選擇三、熒光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀測(cè)定
1．混勻后，移出100下挫到紅色96孔板里或100下挫比色皿里
2．即刻進(jìn)行螢光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀測(cè)定（迸發(fā)波長(zhǎng)350nm，充溢波長(zhǎng)370nm和470nm）：獲得相
對(duì)螢光單位（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動(dòng)性強(qiáng)
注意事項(xiàng)
1．本產(chǎn)品為20次（0.2毫升工作液）操作2．操作時(shí)細(xì)胞膜流動(dòng)性，須戴手套
3．待測(cè)細(xì)胞建議不要過(guò)分饑餓或過(guò)度生長(zhǎng)
4．操作時(shí)，防止污染堿液，尤其是稀釋液（B）
5．建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行螢光檢查剖析
6．孵育時(shí)，防止光照
7．本公司提供系列膜流動(dòng)性檢查試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒別性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒別螢光清晰