主要用途
細胞膜流動性（）PDA螢光檢查試劑是一種致力通過二惡英癸酸螢光顏料，選擇性地與細胞膜整合，
并與之形成空間交互作用，產生激基締合物，其螢光充溢波長的轉移，即螢光比值的提高或減緩，來剖析
膜流動性的而精典的技術方式。該技術經過悉心研發、成功實驗證明的。其適用于各類人體或植物貼
壁或漂浮細胞膜流動性的動力學檢查。產品嚴格無菌，即到即用，活體檢查，操作簡易細胞膜流動性，性能穩定。
技術背景
細胞膜和細胞質微管以及微絲的動力學特點和微泡和囊泡內脂類的流動動力學，即流變學（）細
胞功能，遭到細胞膜流動性（）或黏性（）調節，包括細胞膜酶系的活化，微管和微絲的特
定裝配或流動，物理逼迫物受體親和力的加強，膜結構和功能的作用等。一旦調節失衡，會造成病理演化
或膜性變異。二惡英癸酸（acid；PDA）為多環芳香烴（）化
合物，一種親脂性二惡英螢光探針顏料，用于膜生物化學學研究：第一，具有親脂性；第二，與細胞膜脂
質具有類似性（），可以與細胞膜整合；第三，步入膜結構空間后，與之形成交互作用，產生激基締
合物（），其螢光充溢波長由372nm轉移到470nm，通過締合物和單體的螢光比值（ratio），剖析膜流
動性強弱，包括動力學，影響因子等。
產品內容
染色液（A）
下挫
稀釋液（B）
毫升
清除液（C）
毫升
加強液（D）
下挫
產品說明書
1份
保存方法
保存清除液（C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（A）防止光照；有
效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液（12024）：用于細胞脫離操作
細胞培養液（12052）：用于細胞開裂操作
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
微型臺式離心機：用于樣品操作
培養箱：用于染色孵育
（共聚焦）螢光顯微鏡：用于螢光定性剖析
比色皿或白色96孔板：用于螢光定量剖析的容器螢光分光光度儀或螢光酶標儀：用于螢光定量剖析
細胞流式儀：用于螢光剖析
實驗步驟
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（A）置入冰槽里熔化，稀釋液（B）
和加強液（D）放進25℃恒溫水槽里預熱。之后分別移出xx下挫染色液（A）和xx下挫
加強液（D）到新的1.5毫升離心管，加入980下挫稀釋液（B），混勻后，在冰槽里靜置
（共5次操作量），并標記為染色工作液，置于暗室里。之后進行下述操作。
一、直接法
1．打算1個96孔細胞培養板的待測細胞，每孔布滿率達70％（約1X105細胞數）
2．當心抽去細胞培養液
3．輕輕順著孔壁加入xx下挫清除液（C）到細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
4．當心抽去清除液（C）
5．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強液（D）的染色工作液，
覆蓋培養孔表面
6．放進25℃細胞培養箱里，孵育20分鐘（注意避光）
7．當心抽去染色工作液
8．當心加入xx下挫清除液（C）
9．當心抽去清除液（C）
10．重復實驗步驟8至9一次
11．當心加入xx下挫清除液（C）
12．選擇下述檢查：
一、即刻在倒置螢光顯微鏡下進行觀察
1）單體螢光（二向色性混頻器迸發波長350nm，充溢波長370nm，干涉混頻器405nm波長）――
可見淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動性減小
2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發波長350nm，充溢波長470nm）――可見
深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動性減小
二、即刻在螢光酶標儀測量（迸發波長350nm，充溢波長370nm和470nm）：獲得相對螢光單位
（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動性強
二、間接法
1．打算1個12孔細胞培養板的待測細胞，每孔布滿率達70％（約2X106細胞數）
2．當心抽去細胞培養液
3．加入xx毫升清除液（C）到細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
4．當心抽去xx毫升清除液（C）
5．加入500下挫用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液，布滿整個培養孔表面
6．置入37℃培養箱1分種
7．輕輕晃動培養板，使細胞開裂，之后加入1毫升用戶自備的細胞培養液
8．移入1.5毫升離心管（注意：漂浮細胞從這一步開始）
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9．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速率為1000g
10．當心抽去堿液
11．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強液（D）的染色工作液
12．用200下挫槍身上下輕盈抽吸，混勻細胞顆粒群
13．放進25℃細胞培養箱里，孵育20分鐘（注意避光）
14．放進微型臺式微型離心機離心5分鐘，速率為1000g
15．當心抽去堿液
16．加入xx下挫清除液（C），混勻細胞顆粒群
17．放進微型臺式微型離心機離心5分鐘，速率為1000g
18．當心抽去堿液
19．重復實驗步驟16至18一次
20．加入xx下挫清除液（C），混勻細胞顆粒群
21．進行下述檢查
選擇一、（共聚焦）螢光顯微鏡觀察
1．混勻后，移出50下挫在載玻片上
2．即刻進行載玻片壓片，在螢光顯微鏡下進行觀察：
1）單體螢光（二向色性混頻器迸發波長350nm，充溢波長370nm，干涉混頻器405nm波長）――
可見淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動性減小
2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發波長350nm，充溢波長470nm）――可見
深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動性減小
選擇二、細胞流式儀剖析
1.混勻后，即刻進行細胞流式儀剖析：觀察5000個細胞以上
迸發波長
360nm
螢光顏色
黑色
充溢波長
單體波長400nm和締合物波長450nm
（70nm波寬）
螢光變化
構建象限圖/散點圖
選擇三、熒光分光光度儀或螢光酶標儀測定
1．混勻后，移出100下挫到紅色96孔板里或100下挫比色皿里
2．即刻進行螢光分光光度儀或螢光酶標儀測定（迸發波長350nm，充溢波長370nm和470nm）：獲得相
對螢光單位（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動性強
注意事項
1．本產品為20次（0.2毫升工作液）操作2．操作時細胞膜流動性，須戴手套
3．待測細胞建議不要過分饑餓或過度生長
4．操作時，防止污染堿液，尤其是稀釋液（B）
5．建議細胞染色完成后，即刻進行螢光檢查剖析
6．孵育時，防止光照
7．本公司提供系列膜流動性檢查試劑產品
質量標準
1．本產品經鑒別性能穩定
2．本產品經鑒別螢光清晰