細胞膜流動性（PDA熒光檢測試劑）熒光探針檢測

2023-11-18 12:31:21信息公告45

主要用途

細胞膜流動性（）PDA螢光檢查試劑是一種致力通過二惡英癸酸螢光顏料，選擇性地與細胞膜整合，

并與之形成空間交互作用，產(chǎn)生激基締合物，其螢光充溢波長的轉(zhuǎn)移，即螢光比值的提高或減緩，來剖析

膜流動性的而精典的技術(shù)方式。該技術(shù)經(jīng)過悉心研發(fā)、成功實驗證明的。其適用于各類人體或植物貼

壁或漂浮細胞膜流動性的動力學(xué)檢查。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，活體檢查，操作簡易細胞膜流動性，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

細胞膜和細胞質(zhì)微管以及微絲的動力學(xué)特點和微泡和囊泡內(nèi)脂類的流動動力學(xué)，即流變學(xué)（）細

胞功能，遭到細胞膜流動性（）或黏性（）調(diào)節(jié)，包括細胞膜酶系的活化，微管和微絲的特

定裝配或流動，物理逼迫物受體親和力的加強，膜結(jié)構(gòu)和功能的作用等。一旦調(diào)節(jié)失衡，會造成病理演化

或膜性變異。二惡英癸酸（acid；PDA）為多環(huán)芳香烴（）化

合物，一種親脂性二惡英螢光探針顏料，用于膜生物化學(xué)學(xué)研究：第一，具有親脂性；第二，與細胞膜脂

質(zhì)具有類似性（），可以與細胞膜整合；第三，步入膜結(jié)構(gòu)空間后，與之形成交互作用，產(chǎn)生激基締

合物（），其螢光充溢波長由372nm轉(zhuǎn)移到470nm，通過締合物和單體的螢光比值（ratio），剖析膜流

動性強弱，包括動力學(xué)，影響因子等。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液（A）

下挫

稀釋液（B）

毫升

清除液（C）

毫升

加強液（D）

下挫

產(chǎn)品說明書

1份

保存方法

保存清除液（C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（A）防止光照；有

效保證6月

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液（12024）：用于細胞脫離操作

細胞培養(yǎng)液（12052）：用于細胞開裂操作

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺式離心機：用于樣品操作

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

（共聚焦）螢光顯微鏡：用于螢光定性剖析

比色皿或白色96孔板：用于螢光定量剖析的容器螢光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀：用于螢光定量剖析

細胞流式儀：用于螢光剖析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（A）置入冰槽里熔化，稀釋液（B）

細胞膜流動性是指_細胞膜流動性_細胞膜流動性表現(xiàn)在哪里

和加強液（D）放進25℃恒溫水槽里預(yù)熱。之后分別移出xx下挫染色液（A）和xx下挫

加強液（D）到新的1.5毫升離心管，加入980下挫稀釋液（B），混勻后，在冰槽里靜置

（共5次操作量），并標(biāo)記為染色工作液，置于暗室里。之后進行下述操作。

一、直接法

1．打算1個96孔細胞培養(yǎng)板的待測細胞，每孔布滿率達70％（約1X105細胞數(shù)）

2．當(dāng)心抽去細胞培養(yǎng)液

3．輕輕順著孔壁加入xx下挫清除液（C）到細胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面

4．當(dāng)心抽去清除液（C）

5．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強液（D）的染色工作液，

覆蓋培養(yǎng)孔表面

6．放進25℃細胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）

7．當(dāng)心抽去染色工作液

8．當(dāng)心加入xx下挫清除液（C）

9．當(dāng)心抽去清除液（C）

10．重復(fù)實驗步驟8至9一次

11．當(dāng)心加入xx下挫清除液（C）

12．選擇下述檢查：

一、即刻在倒置螢光顯微鏡下進行觀察

1）單體螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長350nm，充溢波長370nm，干涉混頻器405nm波長）――

可見淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動性減小

2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長350nm，充溢波長470nm）――可見

深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動性減小

二、即刻在螢光酶標(biāo)儀測量（迸發(fā)波長350nm，充溢波長370nm和470nm）：獲得相對螢光單位

（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動性強

二、間接法

1．打算1個12孔細胞培養(yǎng)板的待測細胞，每孔布滿率達70％（約2X106細胞數(shù)）

2．當(dāng)心抽去細胞培養(yǎng)液

3．加入xx毫升清除液（C）到細胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面

4．當(dāng)心抽去xx毫升清除液（C）

5．加入500下挫用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液，布滿整個培養(yǎng)孔表面

6．置入37℃培養(yǎng)箱1分種

7．輕輕晃動培養(yǎng)板，使細胞開裂，之后加入1毫升用戶自備的細胞培養(yǎng)液

8．移入1.5毫升離心管（注意：漂浮細胞從這一步開始）

9．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速率為1000g

10．當(dāng)心抽去堿液

11．加入xx下挫富含染色液（A）、稀釋液（B）和加強液（D）的染色工作液

12．用200下挫槍身上下輕盈抽吸，混勻細胞顆粒群

13．放進25℃細胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）

細胞膜流動性表現(xiàn)在哪里_細胞膜流動性_細胞膜流動性是指

14．放進微型臺式微型離心機離心5分鐘，速率為1000g

15．當(dāng)心抽去堿液

16．加入xx下挫清除液（C），混勻細胞顆粒群

17．放進微型臺式微型離心機離心5分鐘，速率為1000g

18．當(dāng)心抽去堿液

19．重復(fù)實驗步驟16至18一次

20．加入xx下挫清除液（C），混勻細胞顆粒群

21．進行下述檢查

選擇一、（共聚焦）螢光顯微鏡觀察

1．混勻后，移出50下挫在載玻片上

2．即刻進行載玻片壓片，在螢光顯微鏡下進行觀察：

1）單體螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長350nm，充溢波長370nm，干涉混頻器405nm波長）――

可見淺黃色螢光；假如硬度顯著，表明膜流動性減小

2）激基締合物（）螢光（二向色性混頻器迸發(fā)波長350nm，充溢波長470nm）――可見

深紅色螢光；假如硬度明顯減小，表明膜流動性減小

選擇二、細胞流式儀剖析

1.混勻后，即刻進行細胞流式儀剖析：觀察5000個細胞以上

迸發(fā)波長

360nm

螢光顏色

黑色

充溢波長

單體波長400nm和締合物波長450nm

（70nm波寬）

螢光變化

構(gòu)建象限圖/散點圖

選擇三、熒光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀測定

1．混勻后，移出100下挫到紅色96孔板里或100下挫比色皿里

2．即刻進行螢光分光光度儀或螢光酶標(biāo)儀測定（迸發(fā)波長350nm，充溢波長370nm和470nm）：獲得相

對螢光單位（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流動性強

注意事項

1．本產(chǎn)品為20次（0.2毫升工作液）操作2．操作時細胞膜流動性，須戴手套

3．待測細胞建議不要過分饑餓或過度生長

4．操作時，防止污染堿液，尤其是稀釋液（B）

5．建議細胞染色完成后，即刻進行螢光檢查剖析

6．孵育時，防止光照

7．本公司提供系列膜流動性檢查試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒別性能穩(wěn)定

2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒別螢光清晰

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