膜片鉗全細胞模式
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1976年西班牙馬普生物化學研究所Neher和創建了膜片鉗技術(patchclamp)。這是一種以記錄通過離子通道的離子電壓來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術。它和基因克隆技術(gene)并架齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。
在倒置顯微鏡下細胞膜片,讓微電極逐漸緊靠細胞,當微電極與細胞接觸時,給微電極一個很小的負壓,產生吉歐封接,之后再給微電極管里一個很小的負壓,致使電極覆蓋下的細胞膜斷裂,因而促使電極液和細胞內液想通,而和浴室里的氨水絕緣,產生了全細胞模式。全細胞模式不是記錄小片膜的離子電壓,而是記錄全細胞的離子電壓。雖然電極里的膜片被吸破,但是微電極和細胞封接的阻抗很高,這是保持全細胞記錄的重要條件。
用抗生素或則毒素等非生理智成份更換掉電極內液,對電流依賴性通道由于抗生素而遭到哪些影響而進行研究。因而在通道開關動力學,對抗生素作用的功能機制在微觀水平上進行研究。還能否對內外液的含量成份進行任意的改變,來對各組分對膜私密性的影響進行研究,尤其是氫離子和鈣離子的含量要適當。也可以在膜受體相應地使用興奮劑,在對離子通道電壓流動的檢測過程中,對經G蛋白介導的第二信使作用進行了解,對跨膜信息轉導進行研究。
全細胞模式中,電極內液和細胞內液擴散混和除了會促使細胞內液的成份發生變化進而造成細胞的電變化遭到影響,并且還常常讓全細胞記錄發生rundown現象。為了避免此情況的發生,須要用穿孔膜片鉗法(patch),就是在微電極中充灌制霉菌素()和二性霉素(),和細胞膜中的甾體形成反應后,生成了較大顆粒不能否通過并且一價離子容許通過的小孔,這種小孔導電,對所記錄的電壓不會形成影響,和二性霉素相比,制霉菌素有愈發好的療效。
2005-04-28瀏覽次數:1534次
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熱門標簽:膜片鉗與其他技術的結合使用以及實驗中的常用術語膜片鉗離子通道的生理功能和特點
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