生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的測(cè)量1、實(shí)驗(yàn)原理：（1）斐林試劑鑒別還原糖時(shí)，氨水的顏色變化為：由紅色弄成磚綠色(沉淀)。斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒別非還原性糖。獼猴桃糖、麥芽糖、果糖是還原糖。（2）利比亞Ⅲ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為橘紅色，利比亞Ⅳ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為黃色。（3）蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑形成紅色反應(yīng)（肽鍵）。（一）生物組織中可溶還原糖的鑒別1.實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)質(zhì)量含量為0.1g/mL的氫氧化鈉氨水與質(zhì)量含量為0.05g/mL的鹽酸銅堿液混和后，立刻生成淡黃色的Cu(OH)2懸濁液。Cu(OH)2與獼猴桃糖、果糖、麥芽糖等可溶還原糖共熱，才能生成磚黑色的Cu2O沉淀。因而，借助該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶還原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O（二）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒別1實(shí)驗(yàn)原理在酸性濾液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）能與Cu2+作用，產(chǎn)生黃色的配體，這個(gè)反應(yīng)稱作雙縮脲反應(yīng)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子中富含好多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相像的肽鍵，為此，蛋白質(zhì)都可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。試劑配制A液（0.1g/mL的氫氧化鈉堿液）雙縮脲試劑B液（0.01g/mL的鹽酸銅堿液）2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簢L試用物理試劑測(cè)量生物組織中脂類、脂肪和蛋白質(zhì)3、實(shí)驗(yàn)選料?（1、材料應(yīng)含有相關(guān)物質(zhì)，使現(xiàn)象愈發(fā)顯著；2、材料本身應(yīng)無(wú)色，以免對(duì)結(jié)果形成干擾）（1）做可溶還原性糖鑒別實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高，顏色為紅色的動(dòng)物組織，如蘋果、梨，也可用白冬瓜代替。
（由于組織的顏色較淺，便于觀察。）（2）做脂肪的鑒別實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選含有脂肪的種子，以玉米種子為最好，實(shí)驗(yàn)前通常要曝曬3～4小時(shí)。（3）做蛋白質(zhì)的鑒別實(shí)驗(yàn)，可用含有蛋白質(zhì)的花生(可用果汁代替）或豬肉清。4、實(shí)驗(yàn)試劑斐林試劑（包括甲液：質(zhì)量含量為0.1g/氨水和乙液：質(zhì)量含量為0.05g/堿液）、蘇丹Ⅲ或黎巴嫩Ⅳ染液、雙縮脲試劑（包括A液：質(zhì)量含量為0.1g/堿液B液：質(zhì)量含量為0.01g/堿液）、體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精堿液，碘液、蒸餾水。.實(shí)驗(yàn)步驟（1）制備組織樣液（班主任制備）（2）鑒別樣液先在試管中加入2mL組織樣液實(shí)驗(yàn)步驟（1）切塊制做①去掉核桃種皮②用右手的三個(gè)腳趾捉住核桃的一片子葉，使花生子葉低于右手之上（為何？）。雙手持刀片，將子葉切去一層，產(chǎn)生平面。③刀口向內(nèi)，與玉米斷面平行，以均勻的動(dòng)作，自左前方向右后方快速鉸刀，滑行切塊（注意要整個(gè)臂部使勁，而不要腕部使勁。）這么連續(xù)動(dòng)作，切下一些薄片。（2）染色用鋼筆將最薄的幾片材料移至潔凈的載玻片的中央→滴利比亞Ⅲ溶液2-3滴于花生子葉薄片上→2-1min后，吸去堿液→滴50%的酒精驅(qū)走浮色→吸去多余酒精→再滴1-2滴分餾水→蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片。
（3）鏡檢鑒別在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切塊的最薄處（最好只有1-2層細(xì)胞），移至視野的中心→換用高倍鏡觀察，變焦至最清晰。可發(fā)覺細(xì)胞內(nèi)橘紅色的方形小顆粒，這就是脂肪滴（油滴）。若發(fā)覺觀察物外圍也有許多橘紅色小顆粒，則是脂肪跑了下來(lái)。脂肪檢查實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果若用化學(xué)方式怎樣鑒別脂肪的存在?烤制種子后,把子葉置于白紙上用右手?jǐn)D壓,白紙上會(huì)出現(xiàn)透明的污垢,說(shuō)明子葉富含脂肪。（３）蛋白質(zhì)的鑒別操作方式注意問題解釋制備組織樣液。（曝曬、去皮碾磨、過(guò)濾。）扁豆曝曬1至2天，容易碾磨成漿，也可購(gòu)新鮮牛奶以節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。鑒別。加樣液約2ml于試管中，加入雙縮脲試劑A，拌勻；再加入雙縮脲試劑B液3~4滴還原糖實(shí)驗(yàn)視頻，拌勻，濾液變紅色。A液和B液也要分開配制，存儲(chǔ)。鑒定時(shí)先加A液后加B液。CuSO4堿液不能多加。先加NaOH堿液，為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)酸性的環(huán)境。A、B液混裝或同時(shí)加入，會(huì)造成Cu2+弄成Cu(OH)2沉淀還原糖實(shí)驗(yàn)視頻，而失效。否則CuSO4的紅色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色。可用蛋黃取代牛奶。蛋黃要先稀釋。假如稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)中面糊粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底，但是試管也不易洗干凈。
附：淀粉的測(cè)量和觀察用試管取2ml待測(cè)組織樣液，向試管內(nèi)滴加2滴碘液，觀察顏色變化。碘液不要滴太多以免影響顏色觀察蛋白質(zhì)測(cè)量實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果6、討論:(1)選定含有還原糖的生物材料時(shí),能用玉米或則香蕉嗎?為何?答:不行.香蕉本身含有色素,會(huì)掩藏顏色反應(yīng)的結(jié)果;而玉米不含還原糖,蔗糖不是還原糖.(2)斐林試劑和雙縮脲試劑有什么區(qū)別？a堿液含量不同:斐林試劑中CuSO4堿液為0.05g/mL,雙縮脲試劑中CuSO4堿液為0.01g/mLb使用原理不同:斐林試劑實(shí)質(zhì)是新制Cu(OH)2沉淀,雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是酸性條件下的Cu2+c使用方式不同:斐林試劑使用時(shí),先把NaOH堿液和CuSO4堿液混和,之后立刻使用;雙縮脲試劑是先加NaOH堿液,之后再加入3至4滴CuSO4堿液