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德國細胞膜片鉗電壓鉗制

更新時間:2023-10-24 文章作者:佚名 信息來源:網絡整理 閱讀次數:48次

對抗生素作用機制的研究,在通道電壓記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內或膜外)施加各類含量的抗生素,研究它們對通道功能的可能影響,了解這些選擇性作用于通道的抗生素影響人和植物生理功能的分子機理。這是目前膜片鉗技術應用普遍的領域,既有對中藥抗生素機制的闡述,也普遍用在重要毒理的研究上。如開麗等報導細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到靈芝酸酐組鞣質可控制正常和“缺血”誘導的小鼠腦部皮層神經元L-型鈣通道的開放,進而降低鈣內流,對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報導采用細胞貼附式單通道記錄法發覺麻黃堿對培養的小鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。封接是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。日本細胞膜片鉗電壓鉗制Icj物理好資源網(原物理ok網)

過去覺得,膜片鉗只能在培養細胞或酶解的細胞上進行,這樣得到的細胞膜表面比較光滑,才才能產生高阻封接,但缺點是組織的正常三維結構被破壞,但是對神經中樞內突觸特有的傳遞機能的研究未能展開。于是,一些學者構建了組織切片膜片鉗技術(Slicepatch),能夠在喂奶植物腦片制備上做全細胞記錄。1992年細胞膜片,在腦片膜片鉗技術上,日本實驗室***報導在在體貓的視皮層用膜片鉗全細胞記錄研究了視剌激誘發的激動性和***性突觸后電位互相影響及節律性膜電位的變化規律。1993年,加拿大的Dodt和合作,借助紅外電視顯微鏡監視,致使膜片鉗記錄不但能否在神經元胞體及其樹突上進行,并且可同時在這兩個不同的部位作膜片鉗記錄。日本膜片鉗專題膜片鉗技術實現了小片膜的孤立和高阻封接的產生,增寬了記錄頻帶范圍,增強了幀率。Icj物理好資源網(原物理ok網)

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一、記錄設備首先,盡可能建立膜片鉗記錄設備是實驗前的重要步驟,如用模型細胞測定電子設備、安裝并測試應用軟件、調節光學顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用直徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的。標準的毛細玻璃管(外經1.5mm,管壁厚0.3mm)適宜于制做單通道記錄的微電極,而全細胞記錄則應選管壁較薄(0.16mm)的毛細玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低。三、封接()技術封接(seal)是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。封接不好噪音太大必然影響細胞膜聯通號的記錄,通常要求封接阻抗起碼20GΩ才可進行常規記錄。為了產生良好封接必須保持清潔的氨水、良好的視野以及適當的電極鍍膜。為了獲得較好的"百兆歐封接",細胞表面必須裸露便于微電極前列能接觸細胞,細胞的大小也是成功記錄的個誘因,通常選擇10-20um的細胞比較理想。Icj物理好資源網(原物理ok網)

神經藥理研究室是現代藥理學教育部重點實驗室和安徽省應用藥理重點實驗室的組成部份,在上世紀八九十年代就開始成立膜片鉗實驗室細胞膜片,屬國外較早一批舉辦此工作的課題組,二六年來,在導師肖杭院士領導、全體研究生的共同努力下,如今這門技術早已成熟穩定,并得到國際國外同行的認可。基金會的頒獎評語∶膜片鉗技術燃起了細胞和分子水平的生理學研究的**之火,為細胞生理學的研究帶來了一場**性的變化,它和基因克隆技術并駕齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。細胞膜由單糖雙分子層和和蛋白質構成。Icj物理好資源網(原物理ok網)

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高阻封接問題的解決除了改善了電壓記錄性能,還驟然出現了研究通道電壓的多種膜片鉗形式。按照不同的研究目的,可制成不同的膜片構象。(1)細胞吸附膜片(cell-)將兩次拉制后經加熱拋光的微管電極放在清潔的細胞膜表面上,產生高阻封接,在細胞膜表面隔離出一小片膜,旋即通過微管電極對膜片進行電流鉗制,區分檢測膜電壓,稱為細胞貼附膜片。因為不破壞細胞的完整性,這些方法又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因而,為測定膜片一側的電位,需測定細胞膜電位并從該電位除以玻管電位。從膜片的通道活動看,這些方式的膜片是極穩定的,因細胞骨架及有關代謝過程是完整的,所受的干擾小。一些學者構建了組織切片膜片鉗技術(Slicepatch),能夠在喂奶植物腦片制備上做全細胞記錄。全手動膜片鉗價錢Icj物理好資源網(原物理ok網)

屯流鉗素向細胞內注入剌激電壓,記錄膜電位對剌激電壓的反應。日本細胞膜片鉗電壓鉗制Icj物理好資源網(原物理ok網)

細胞膜片鉗記錄(whole--)是應用*早,也是*廣的鉗位技術,它相當于連續的單電極電流鉗位記錄,也就是說全細胞記錄類似于傳統的細胞內記錄,但它具有更大的優越性,如高碼率、低噪音、極好的穩定性以及能控制細胞內的成份等。全細胞記錄技采測定的是一個細胞內全部**通道的電壓,記錄過程中電極的氨水代替了原細胞質的成份。其實膜片鉗記錄技術與*初的單電極電流鉗位相比進步了好多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面,細胞或腦片的組織選擇及實驗堿液的制備一直是很重要的步驟。日本細胞膜片鉗電壓鉗制Icj物理好資源網(原物理ok網)

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