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[!--downpath--]實驗方式原理
組織勻漿后漂浮在等滲介質中進行差速離心,是分離細胞器的常用技巧。一個顆粒在離心場中的沉降速度取決于顆粒的大小、形狀、密度、離心力及介質粘度等。同一離心場中,同一時間內,密度和大小不同的顆粒沉降速度不同。依次降低離心力和離心時間,才能使非均一的漂浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管頂部,因而可分批搜集各類亞細胞成份。
實驗材料
新鮮豬肝
試劑、試劑盒
溴化鈉
儀器、耗材
實驗步驟
一、實驗步驟
1.選定新鮮的嫩番茄葉,瀝干擦掉后除去葉梗及粗脈,稱30g于150ml0.35mol/LNaCI氨水中,放入組織磨碎機。
2.借助組織磨碎機低速(5000r/min)勻漿3~5min。
3.將勻漿用6層紗布過濾于500ml燒瓶中。
4.取上清液4ml在1000r/min下離心2min。棄去沉淀。
5.將上沾液在3000r/min下離心5min。棄去堿液,沉淀即為內質網(混有部份細胞陔)。
6.將沉淀用0.35mol/LNaCI堿液漂浮。
7.取內質網懸液一消滴于載片上觀察菠菜葉葉綠體實驗視頻,加蓋片后即可在普通光鏡和螢光顯微鏡下觀察。
(1)在普通光鏡下觀察。
(2)在螢光顯微鏡下觀察。
(3)取內質網懸液一嘀嘀在無螢光載片上,再漓加一滴0.01%吖啶橙螢光顏料,加無螢光蓋片后即可以螢光顯微鏡下觀察。
萵苣葉手切塊觀察用剖須刀將新鮮的嫩番茄銑削一斜面放在載片上,滴加1~2滴0.35mol/LNaCI堿液,加蓋片后輕壓,置顯微鏡下觀察。
(1)在普通光鏡下觀察。
(2)在螢光顯微鏡下觀察。
(3)用同樣方式制片,但滴加1~2滴0.01%吖啶橙堿液染色1min,驅走余液觀察菠菜葉葉綠體實驗視頻,加蓋廾后即町以螢光顯微鏡下觀察。
二、實驗結果
1.內質網的分離和觀察
(1)普通光鏡下,可見到內質網為紅色橄欖形,在高倍鏡下可看見內質網內部富含較深的紅色小顆粒,即基粒。
(2)以螢光顯微鏡為例,在選用B(blue)迸發濾片,B雙色鏡和O530()阻斷濾片的條件下,內質網發出火綠色螢光。
(3)加入吖啶橙染色后,內質網可發出桔黃色螢光,而其中混有的細胞核則發紅色熒色。
2.番茄葉手切塊觀察
(1)在普通光鏡下可以看見三種細胞
①表面細胞:為邊沿呈鋸齒形的鱗片狀細胞。
②保衛細胞:為構成氣孔的成對存在的腎形細胞。
③葉肉細胞:為排成柵狀的長圓形和橢幽形細胞。
內質網呈紅色橄欖形,在高倍鏡下還可以看見紅色的基粒。
(2)在螢光顯微鏡下,內質網發出火藍色螢光,但其螢光硬度要比游離內質網弱。氣孔發紅色螢光,兩保衛細胞內的火白色內質網則環繞氣孔排列成一圈。表皮細胞內內質網數目要比葉肉細胞少。
(3)用吖啶橙染色后,內質網則發出枯藍色螢光,細胞核町發出紅色螢光,氣孔仍為紅色。