你們好，明天為你們推薦一篇發表在上的文章，文章標題為“DNAToCell”，通信作者是北京學院物理化工大學李金波院士,主要從事核苷酸物理生物學、基因醫治相關領域。
聯接細胞膜蛋白與溶酶體轉運受體LTR的雙特異性嵌合體提供了一種有效的降解疾患相關靶向的醫治方式。在這兒，作者報導了一種新的樹突化DNA嵌合體()策略，使用生物正交弧菌推動的烷滲碳環加成將樹突DNA與蛋白質相結合，形成的才能將靶標蛋白運輸到溶酶體中進行清除。具體來講，作者通過降解致畸膜胚乳素(NCL)和表皮生長因子受體(EGFR)來證明的有效性，的防癌應用在大鼠腫瘤異種移植模型中得到驗證。這項工作為快速開發高效的膜蛋白降解劑提供了新的途徑，具有寬廣的研究和醫治前景。
細胞表面清道夫受體(SRs)作為陰離子絡合物結合受體已被用于DNA納米技術中的貨物運輸。已知聚陰離子DNA納米材料靶點SR，之后通過水泡介導的內吞作用順著內小體途徑內化。SRs在癌細胞上豐富細胞膜蛋白，但是，SRs作為一種適用的LTR介導蛋白質降解的潛力仍未被探求。
作者用三倍體乙酸丙酯結合液相寡核酸合成了一個具有三個T10分支和一個T10莖的多胸腺吡啶DNA樹突(PTDD)。在莖端用二苯并環辛(DBCO)修飾后，通過應變推動炔烴-疊硫化物環加成(SPAAC)將PTDD與疊硫化物修飾的POI黏結劑偶聯，得到。
以免疫球蛋白G(IgG)為模型POI，-PAGE驗證了PTDD與抗IgG抗原偶聯產生I-。采用吸收波譜定標方式估算I-的PTDD/抗原摩爾比平均值為2.5。人肺囊腫A549細胞用Alexafluor-647標記的IgG(IgG-647)和抗IgG或I-孵育，流式細胞儀剖析顯示，與對照相比，I-孵育后細胞螢光持續提高，18h達到平臺期。這表明介導的特異性和有效的細胞攝入IgG。內吞作用依賴于官能團-受體互相作用，當過量的PTDD或SRs抑制劑羥基化牛血清白蛋白(mBSA)可以制止該過程。共聚焦螢光成像進一步顯示，在I-診治后，IgG-647與染色的溶酶體共定位，表明細胞攝入后溶酶體運輸有效。
膜NCL的抑制已被報導為一種有效的癌癥殺滅方式，作者將PTDD偶聯到對膜NCL具有高親和力和特異性的DNA適體，合成了NCL靶點(N-DENTA)，產物經尿素-PAGE、電噴霧電離質譜(ESI-MS)得以確認。N-有效地與A549細胞結合，其平衡解離常數(Kd)為69.5±8.9nM，強于PTDD(Kd=121.5±11.2nM)和(Kd=129.5±8.3nM)，可能是因為多價效應。據悉，在生理條件下表現出較高的穩定性，在10%胎牛血漿(FBS)中孵育24小時后，仍有87%保持完整。
流式細胞術剖析顯示，以劑量依賴的方法除去細胞表面的NCL，半最大降解含量(DC50)為25nM細胞膜蛋白，在50nMN-孵育48h后，最大降解率(Dmax)為60%。blot剖析顯示N-使膜NCL水平增加了68%。
定量質譜進一步對N-處理過的A549細胞進行全蛋白質組剖析。N-推動了膜NCL的明顯減少。同時，還觀察到NCL互相作用或調控的蛋白，如半乳糖凝集素-3()和rho相關蛋白激酶2(ROCK2)的產率變化。據悉，N-在人子宮癌HeLa細胞、乳腺癌MCF-7細胞和肝細胞癌HepG2細胞中也能介導膜NCL的降解，具有廣泛的適用性。那些數據共同驗證了降解膜NCL的能力。
最后，作者對降解機理進行探究，抑制劑以及基因干擾實驗證明降解過程依賴于SRs。體外抗增殖實驗和植物實驗均證明介導膜蛋白降解的醫治優勢。
其實，作者開發了平臺，有以下幾個優點。首先，是模塊化和通用的。取代蛋白絡合物可用于擴大可靶點空間。諸如，還使用西妥昔單抗作為蛋白結合劑降解A549細胞上的表皮生長因子受體(EGFR)。其次，SRs的高抒發和廣泛分布使成為現有膜蛋白降解技術的補充，廣泛適用于各類生物和癌癥相關的環境。第三，有效和持久的蛋白質降解使吸引進一步的毒理用途。最后，樹形DNA固有的物理可編程性和可調性可能比提供額外的可控性。反正，通過降解胞外膜蛋白為研究和醫治提供了新的可能性。