實驗細胞保持正常狀態是實驗成功的基石。您在蛋白抒發敲低、藥物處理或特殊培養細胞以后,是否有過第一次實驗結果令您非常激動、卻在以后的重復實驗中發覺了誤差而令您的心情一落千丈的經歷?這是這跟您樣本中死亡細胞的水平有關。這也是我們明天想要說的一個話題——定期檢測細胞活性,隨時關注細胞狀態。雖然這組數據不是您課題中所必須的,但它卻是您控制實驗的有效手段。
細胞活性是指樣本群體中健康細胞所占的比列。細胞活性的測量對于觀察實驗過程中細胞的生理狀態是必須的。細胞活性會受環境誘因影響,包括細胞培養各參數的改變、藥物和生長因子的剌激以及在各類癌癥下做出的反應。諸如,癌細胞表現出細胞活性強化,從而導致細胞異常增殖及逃避細胞自噬,與之相反的是,神經退行性和其他組織退行性疾患則以進行性細胞遺失為特點。損傷和感染也會對細胞存活形成負面影響,造成壞死或自噬。以上,細胞本身的健康與癌癥之間的關系案例,警示我們在不同實驗背景和模型系統中檢測細胞活性非常必要。
科學家們早已開發了用于不同實驗平臺的多種檢查細胞活性的技術。具體來說,細胞檢查可以依據測量原理進行分組,包括細胞增殖、質膜完整性、代謝活性和線粒體功能。我們不僅通過活性測量快速查看細胞群體的總體健康狀況,還可以達到更深層的需求細胞膜選擇性通透,就是通過它來確定活性損壞時細胞的死亡形式-細胞自噬還是壞死。
XTT檢查(XTTCellKit#9095)是一種可用于測量細胞活性的代謝性檢查方式。在健康細胞中,XTT通過線粒體酶轉換成白色的甲瓚顏料。接著通過測量450nm處的相對吸光度來恐怕活細胞數目。這些方式的優點之一是操作簡單,不須要細胞固定、通透或二次檢查方式,而且還能在剖析后能夠繼續檢測細胞。
代謝檢查的第二個方法是刃天青檢查(CellKit#11884)。將刃天青試劑添加到細胞培養物中,在健康細胞中,刃天青試劑通過酯化酶還原成為螢光試鹵靈,最終試鹵靈的量與樣品中的活細胞成比列。與XTT檢查類似,刃天青檢查中使用的細胞也可以繼續用于下游剖析。
活/死細胞計數檢查是評估細胞活性的另一種常用方式。這一類的測量使用細胞私密性活體顏料、細胞不通透顏料或二者的組合,同時標記細胞群體中的活細胞和死細胞。諸如,臺盼藍是一種雜環顏料,難以穿透細胞膜,因而不會步入健康細胞。并且,發生膜受損的死亡細胞會吸收臺盼藍,所以最終能否使用血細胞計數器計數死亡(紅色)和存活(無色)細胞的數目。
另外,免疫組織物理法(IHC)也可以測量細胞活性。這些方式通常用于觀察在健康與腫瘤組織中靶蛋白的分布及抒發模式,同時在保持組織切塊的完整細胞構架的情況下確定發生細胞死亡的區域。通過使用細胞增殖(包括Ki67或PCNA)或自噬(包括裂解的-3和PARP)的標記物進行定量剖析。
評估細胞活性的方式有好多,您最常做哪一種呢?歡迎留言到評論區,便于你們交流學習。
另外,在細胞實驗中,如上文所提,細胞的狀態非常重要,要保證實驗結果的一致性細胞膜選擇性通透,可以通過檢測細胞活性保證細胞的健康狀態,趁此機會。