地址:河北省石家莊市濱江區濱安路688號天和高科園2實驗目的流式細胞儀測量各組細胞線粒體膜電位變化。儀器試劑2.1主要試劑表2.1.1主要試劑儀器廠家胎牛血漿日本,緩沖液英國,培養基日本,培養基日本,Gibco抗生素、鏈霉素雙抗()0.25%日本,-1線粒體膜電位測量試劑盒上海,碧云天2.2主要儀器表2.2.1主要儀器儀器廠家CO2細胞培養箱法國,(SW-CJ-1FD)倒置照相顯微鏡日本,Leica(IX51)無菌操作臺中國,上海凈化(SW-CJ-1FD)低速離心機中國,北京盧湘儀(5702R)流式細胞儀日本,BD()實驗方式3.1細胞培養H9c2細胞株為貼壁細胞,培養于含培養液,待細胞長至80左右時,用0.25%胰酶消化傳代,放在CO2,37恒溫培養箱中,平均代,取對數生長期細胞進行實驗。3.2膜電位測量檢查JC-1染色工作液的配制:取適量容積的JC-1(200),根據每50JC-1(200)須要加入mL的超純水比列稀釋JC-1細胞膜電位,混和后劇烈渦旋混勻,之后加入JC-1色緩沖液(5),混勻后即得JC-1染色工作液。
將對數期生長的細胞消化、離心和重懸后,計數,以每孔3-510中,培養過夜后,每孔加入不同含量的SM-1曝露48小時后,用胰酶消化并搜集細地址:廣東省廣州市濱江區濱安路688號天和高科園20.5mL的細胞培養液中,之后加入0.5mLJC-1染色工作液,顛倒混勻后,放置在細胞培養箱中37孵育20分鐘。JC-1染色緩沖液(5)需加入mL分餾水的比列,在冰浴條件下配置適量容積的JC-1染色緩沖液(1)。37孵育20分鐘結束后,以怠速600分鐘,棄去上清細胞膜電位,盡量不要吸出細胞。之后用JC-1染色緩沖液(1)清洗次,離心沉淀細胞,棄去上清。之后加入適量容積的JC-1染色緩沖液(1)重懸后,使用流式細胞儀測量,迸發光波長為525nm,發射光波長為595nm,測定螢光硬度。結果與討論圖4.1是采用JC-1染色法測量線粒體膜電位結果。結果顯示,與對照組相比,DOX1μmolL-1處理細胞后可以明顯增加線粒體膜電位(p<0.01),柴胡水提取液12.5,25-1組均就能明顯增加線粒體膜電位(p<0.05,p<0.01)。結果提示,圖4.1各組細胞線粒體膜電位變化