摘要
初期的“T細胞活化”事件是在質膜的脂類微環境中啟動的。脂類膜次序的作用(L)o)在時空訊號中，T細胞中的抗體受體被定位，但仍不清楚。我們研究了膜序(L)的作用。o)/衰弱(Ld)抗體特異性CD4+T細胞的激活和克隆的擴增首先導致膜衰弱，之后通過將固醇插入衰弱的質膜中來重建膜序。抗體特異性CD4的顯著恢復+用尿酸重建破壞的膜序后，觀察T細胞的增殖反應。那些重建實驗證明了Koch的假定，證明了尿酸依賴的膜序(L)o)對于CD4所形成的反應是至關重要的。+并強調T細胞膜有序性和脂類微環境在T細胞膜抗體受體訊號傳遞中的重要性。
序言
用克隆型CD4檢查外源抗體+T淋巴細胞通過其抗體受體，訊號轉導通過多個抗體受體相關訊號分子發生在質膜的脂類微環境中。,,。據悉，協同剌激蛋白CD28和其他輔助性/黏附蛋白啟動許多蛋白酪谷氨酸激酶(如p56)驅動的訊號通路/網路。萊克)，適配器蛋白(LAT)，小GTP結合蛋白,,。那些在質膜上啟動的訊號風波激活了三種轉錄因子NFκBnft和api，它們對推動CD4的存活、克隆擴充和分化至關重要。+T細胞,,。盡管乙酸化風波的時間序列和T細胞內的多種訊號通路/網路仍然是研究的焦點，但脂類微環境和血脂依賴的膜序在CD4質膜訊號蛋白的空間組織中的作用仍然是研究的焦點。+T細胞及其在檢查外源抗體后的克隆擴增尚不清楚。
質膜的組成賦于了它化學性質。用飽和/不飽和脂和固醇(Guv)或從細胞膜(Gpv)衍生的合成/模型膜的實驗，為了解其組成磷脂的締合行為提供了看法。,,,,,,。不飽和和飽和磷脂在視覺上分離成無序(L)。d)和有序(L)o)階段，分別,,,,,,。但是，在維持在37°C的不對稱生物膜中，這類結構域的功能意義仍舊存在爭議。,,,。近來的報導顯示抗體受體均勻地分布在天真T細胞的質膜上，但是單體tcrαβ與mhc肽復合物結合。表明它們被排除在納米級脂類結構域之外。與此相一致的是初期T細胞訊號風波發生在脂類納米結構域之外的數據。。相反，我們覺得細胞膜呈現出小的動態納米級有序結構。,,,,,。當有序結構域中的蛋白質/分子被交聯以形成中尺度的脂筏時，小的動態脂筏被穩定出來。,,,,,。據悉，CD4之間的直接互相作用+T細胞與抗體提呈細胞推動有序結構域的結合。提議的T細胞活化模型須要考慮膜脂微環境的作用，非常是尿酸在L的產生中的作用。o和Ld膜上的結構域。飽和磷脂的締合行為很可能促使真核細胞質膜中有序結構域的產生，如同模型/誘導膜中所報導的那樣。,,,,,,.
我們研究了尿酸依賴的膜序在原發性CD4抗體特異性應答中的作用。+T細胞CD4抗體特異性反應+T細胞先用7-酮固醇增加其膜序，之后通過插入分級的固醇來重建固醇依賴的膜序。Di-4-是一種極性敏感的螢光顏料，用于膜的波譜成像，并在每位細胞的基礎上用流式細胞儀定量膜序。親脂螢光探針插入外膜，檢查到膜水化后脂類堆積。我們展示了抗體特異性CD4的復活。+T細胞克隆擴增后，重建固醇依賴的膜序。
方式
大鼠
4~8周齡αβ轉基因用于這兒報導的實驗。按照機構植物保護和使用委員會(IACUC)批準的合同，大鼠被安置在維拉諾瓦體內并飼養。在本原稿中提出的在實驗研究中使用大鼠的倫理認可得到了維拉諾瓦學院IACUC的批準。
細胞制備和細胞培養
將DO11大鼠的淋巴結(外周、腋下、下頜)細胞用玻璃切塊蒸熟后制成單細胞懸液。提取細胞通過100m篩(BD生物科學，圣路易斯，CA，日本)過濾，再漂浮在RPMI1640-含5%FBS(Sigma，MO，USA)和2毫米HEPES緩沖液(Sigma，MO，USA)中。細胞計數，1000rpm離心10min，4°C離心10min，終含量為1×10時，再漂浮細胞顆粒。6在含10%FBS、2mm非必需多肽、50IU/ml抗生素和50μg/ml抗生素、1μg/ml漏斗酮、2mmHEPES(-，Grand，NY)的RPMI1640培養基中細胞/ml。
7-酮尿酸和尿酸在質膜中的插入
為了形成膜衰弱，從DO11TCR轉基因大鼠中分離出淋巴結細胞，離心后再漂浮于Opti-MEM培養基(-Life，Grand，NY)1×10。6與7-酮固醇(7-kc)酰基-β-環寡糖(Mβcd)(Sigma，MO，日本)復合物在溫度下孵育10分鐘前的含量(如前所述)。分別在70M、35M和17.5M氨水中與水溶性的0.3mmββCD混和，得到7-KC和M-KC-CD配合物。尿酸-M-βCD配合物的生成也是類似的.MβCD推動了(和血脂)插入質膜。,。在Opti-MEM中與7-KC-MβCD(和尿酸-MβCD)復合物孵育，以降低血漿尿酸的曝露.為恢復細胞膜的有序性，加入固醇(35M&17.5μM)MβCD(0.3mm)(Sigma，MO，USA)復合物，加入7-KC-MβCD復合物后，在溫度下孵育10min。
流式細胞儀對膜序與膜衰弱的評價
淋巴結細胞用0.5M(終含量)的Di-4-和抗CD90.2-AlexaFluor-647在溫度下孵育20min(-Life，Grand，NY，USA)。。T細胞計數采用抗CD90.2--647結合物(日本加利福尼亞州，).用流式細胞儀(BD生物科學，加拿大溫哥華州東盧瑟福)對枚舉T細胞的細胞膜進行偏振光區分檢測。。在溫度下(~69°F)用Di-4-和抗CD90.2--647標記后，用等滲0.1MPBS清洗探針。與膜中磷脂平行排列的膜顏料di-4-，在488nm激光迸發下，可以對質膜進行偏振光區分成像，獲得較高的膜流動性或無序性(L)。d)在630nm處，縮聚或膜序(L)o)在570nm處,,,,。在溫度下(~69°F)，在FL2(570Nm)和FL3(630Nm)通道中捕獲了Di4-螢光團的幅射。
經適當的補償后，在的FL4通道上捕捉到在670波長范圍內的AlexaFluor-647在CD90.2陰性細胞上的發射。未處理淋巴結細胞“不醫治組”為陽性對照，用0.3mmMβCD處理的細胞為載體負荷對照。為了量化膜次序/流動性的改變，我們使用了早先公布的公式的修正版本來估算相對(R)gp值，以評估di-4-標記的免疫細胞的整體膜序/衰弱。。簡單地說，GP值是通過在570nm和630nm處表示Di-4-螢光發射的歸一化比值來估算的，分別反映了膜的整體有序性和無序性。流式細胞術是依照原先公布的設置設置的。。每位樣本(10,000個細胞)估算GP，其中大多數為門控隊列。而曾經的報導使用雙光子顯微鏡數據來評估在用di-4-標記質膜后的脂類堆積情況。，我們用流式細胞術進行定量剖析是在單細胞基礎上進行的。
$RGP={{Text{~}frac{{MFI_{570}-{Text{{630}{MFI_{570}}+{Text{{630}$
RGP=比值廣義極化，MFI=平均螢光硬度。
DI-4-染色細胞共聚焦顯微鏡下的活細胞顯像
為了排除顏料共焦成像內部化的可能性，我們根據已公布的合同進行了染色共焦成像。。αβ轉基因大鼠淋巴結T細胞(1×10)6/ml含量)在Opti-MEM無血漿培養基中被準許結合多聚-L-賴谷氨酸鍍層玻璃玻片(日本PA電子顯微鏡學)在4°C下曝曬60min，在溫度下在漢克斯平衡鹽氨水(HBSS)(熱費舍爾，MA)中浸洗過多的細胞，同時使幻kt板重新適應環境濕度。貼于玻片上的細胞用35μM7KC(50μl)處理或未處理10min。在溫度或4°C下，用5μMdi-在HBSS中浸洗玻片20min或4°C，除去超過7KC的現象。L用4%多聚甲醛(PCHO)乙酸鹽緩沖液(PA，日本)在溫度下固定5min，用Di-染色。過量的di-顏料是通過在安裝步驟前傾斜幻kt板來消除的。染色細胞用含DAPI的10μ1安裝培養基(烏克蘭加利福尼亞州矢量實驗室)覆蓋，之后用玻璃玻片覆蓋。采用LeicaTCSSP8倒置共聚焦螢光顯微鏡，在630×全放大率下，用標準和HYD共聚焦螢光顯微鏡對細胞進行成像，并進行序貫掃描。原本描述的共焦設備設置，以及下邊描述的小變化，用于圖象采集。。用408nm(DAPI)和488nm(Di-4-)激光照射樣品.用標準PMT檢查DAPI，波長410~460nm。用兩種采集Di-4-，第一次測量波長范圍為500~540nm(有序相)。第二種HDPMT在640~750nm范圍內搜集波長(無序相)。圖象大小為512×512象素，針眼調整為1個Airy單元。掃描速率為400Hz，直線平均設置為4。HyD2(有序)和HyD3(無序)的增益設置為中等水平。對焦設置為1，有序相位為偽色紅色，無序相為偽色藍色。
MTT法評價T細胞增殖
抗體特異性克隆擴增/CD4應答+用MTT剖析試劑盒對T細胞進行檢查(公司，麥迪遜，WI，日本)。未經醫治或0.3mmMβCD醫治的CD4抗體特異性克隆擴增+細胞，7-KC和/或尿酸處理的CD4+T細胞在剌激肽c-ova存在的情況下，被檢測其克隆擴張的可能性。323–339(測試)和c-–334(對照)肽(Sigma-，，Tx)由同基因抗體提呈細胞抒發。將MTT(3-(4，5-二硝基咪唑-2-基)-2，5-二硝基四氮唑溴)試劑(20l)加入96效價板中培養4h，用分光光度計在490nm處測定光密度。.
統計剖析
Anova剖析與Tuke-后測剖析在所有實驗中均有顯著性差別.Anova剖析致力找出各組均值之間的差別，而Tukey-后測剖析則量化了這種差別。當p值
道德認可和參與的同意
在本原稿中提出的實驗研究中，大鼠的使用得到了維拉諾瓦學院植物保護和使用機構委員會(IACUC)的批準。本研究中使用的所有方式都是按照強制性的機構、州和聯邦細則和準則進行的。據悉，這項研究是根據與“抵達準則”一致的準則進行的().
結果
尿酸在7-Kc誘導的衰弱細胞中恢復質膜秩序
7-kc，一種文蛤，當被傳送到CD4膜時+T細胞在不影響T細胞活力的情況下改變細胞膜次序及其對外來抗體的增殖能力。通過插入尿酸重建膜次序后，T細胞中抗體特異性應答的恢復尚未被測量.為了研究和量化尿酸依賴的平衡從無序階段到更有序階段的轉變，我們首先開發了一個實驗系統，以控制cd4質膜的破壞和膜秩序的重建。+T淋巴細胞。先用7-KC(70μm，35μm，17.5M)處理淋巴結細胞細胞膜抗原，之后用不同含量的固醇(35μm，17.5M)進行重組，或未重組。固醇及其衍生物，因為其兩親性，不能直接插入質膜，因而與水溶性MβCD絡合膜傳遞。,。MβCD在低含量下不會改變活化(補充圖)。(A)CD4抗體特異性增殖+T細胞(附圖)b)。為評價T細胞的膜功能衰弱，采用647抗大鼠CD90.2和螢光Di-4-染色，分別與MβCD(0.3mm)或7-KC(70M-17.5M)-MβCD復合物在溫度下孵育10min。為了確保Di-4-螢光顏料與膜結合，并在我們一般在溫度下進行的流式細胞術實驗年報告膜次序/衰弱，我們用共聚焦顯微鏡對染色細胞進行了觀察。作為對照組，我們用Di-4-在4°C染色，這些氣溫可以避免細胞內吞。補充圖說明大部份顏料與質膜結合。據悉，我們沒有觀察到大量內在化的證據(圖)。S，面板B&C對N&O)或7-KC的存在(如圖所示)。S，面板F&G對R&S)。
流式細胞術實驗中，計數T細胞在488nm處迸發膜結合DI-4-顏料，用流式細胞儀測定其在570(FL2通道)和630(FL3通道)nm處的發射。用613nm綠光激光迸發抗Thy-1抗原，613nm綠光迸發T細胞，螢光團在668nm(FL4通道)處發射。膜序的變化采用比值-米制GP公式量化，其中負值表示“紊亂”，正值反映膜中的“順序”。未處理淋巴結細胞以Di-4-染色和抗Thy-647標記作為對照，其比值為0.35度規的廣義極化(GP)值。70m7-KC處理細胞的平均GP值為-0.6，而35M和17.5μM尿酸處理的70M細胞的平均GP值分別為-0.05和-0.1，差別有顯著性(P值分別為-0.05和-0.1平均GP值)。A、B)。35μM7-KC處理細胞的GP值平均為0.2，用35M和17.5μM尿酸重組后的GP值約為0.35。A、B)。用17.5μM7-KC(0.35gp值)可形成極小的膜衰弱，用35M和17.5μM尿酸重組時，膜衰弱程度在GP量表上分別為0.4和0.45(如圖所示)。A、B)。相比之下，0.018~0.018mmMβCD載體對照細胞與對照細胞(未處理細胞)相比較(圖1)。B；0.35-0.4GP值)。結果表明：70m7-KC使平衡從有序相明顯轉變為無序相，添加35M尿酸可明顯改變膜的有序性，但重組膜次序顯著高于未處理和載體(0.3mmMβCD處理細胞)對照組(如圖所示)。a)。我們的數據表明，7-KC曝露后，T細胞膜次序發生了劑量依賴性的改變，只有35M尿酸處理的細胞能夠觀察到膜序的顯著構建，而用17.5μM尿酸的重組作用最小。
圖1
Di-螢光染色后T細胞膜排列和衰弱的評估。淋巴結細胞經di-染色后，用抗Thy-647染色.以7-KC和(或)不同含量的甘油三酯和MβCD載體對照(白色盒)計數T細胞亞群。在570nm處發射，波譜移至630nm，分別表現為FL2和FL3通道的平均螢光指數(MFI)、膜有序性和無序性。典型實驗點圖顯示有序(X軸)和無序(Y軸)膜攜帶T細胞(A-上面板)和以RGP值表示的不同醫治組的次序和衰弱的量化(B-下邊板)顯示。對照組(非醫治組)在實驗開始(第1次對照)和結束時(第2次對照)進行剖析。所有數據從5個獨立試驗中估算。錯誤條表示標準錯誤。用JMP程序進行單向殘差剖析和TUKEY后剖析，估算各組間的統計學意義。具有不同聯接字母的組之間有顯著性差別。(P
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膜序重建后抗體特異性T細胞應答的恢復
接出來，我們研究了脂筏基膜序在CD4抗體特異性克隆擴增中的作用。+T細胞7-kc和/或尿酸處理的淋巴結細胞與剌激的c-ova一起孵育。323–339，或控制c-–334，肽作用48和72h，我們用MTT比色法測定CD4細胞的增殖反應。+T細胞MTT法測定細胞培養中與活細胞數和增殖細胞數密切相關的代謝活性。,。圖形作為對c-ova的回應323–33970m7-KC處理的淋巴結細胞在48h時的增殖率約為未處理對照組的4倍。經70m7-kc處理的細胞增殖減小，類似于無抗體細胞培養或無剌激控制肽c-ova存在時的反應。324–334(覆盆子)a)。低含量7-kc對Cova的抑制作用323–339D_(11)CD4肽特異性增殖反應的研究+T細胞含量依賴性(圖1)。17.5m7-KC曝露僅比未接受7-KC醫治的對照組低0.5倍。a)。70M7-KC處理的淋巴結細胞，與未重組的70M7-KC培養相比，與未重組的70M7-KC培養相比，其膜序與35M固醇作用后的增殖反應均無顯著恢復(P值>0.5)(P值>0.5)。a)。35M固醇可明顯(p值a)。用17.5M固醇進行重建后，細胞增殖發生微小變化。
這是用7-KC處理細胞后重建膜衰弱所用的最低含量(70M，35M，17.5M)。a)。C-ova對T細胞增殖反應的研究323-3390.3mmMβCD載體控制組的肽與未根治的對照組相像(在0.3mmMβCD不存在時)，這種對照實驗否認了7-KC±膽固醇的特異性作用。在細胞中加載額外固醇(35M&17.5M固醇醫治組)，在沒有任何之前接觸7-KC的情況下，沒有表現出提高的增殖反應(圖1)。a)。這種反應與在c-ova剌激下形成的反應相像。323–339單用氨基酸，但顯著低于“不醫治組”和接受c-ova的培養。324–334控制肽后兩組為陽性和特異性對照。CD4+具有尿酸膜次序的T細胞對c-ova的反應323–339肽，72h時出現重組增殖。反應趨勢和劑量效應遵守48h時觀察到的規律。簡單地說，作為對c-ova的回應323–339，70個經m7-kc處理的淋巴結細胞與兩種對照培養物的增殖能力相當，其中一個具有c-ova。324–334非剌激性肽，第二，在沒有抗體的情況下(如圖所示)。b)。據悉，7-kc處理細胞，作為對剌激c-ova的反應。323–339肽，增殖量比未處理的細胞低7.3倍。
C-–33935M7-KC處理的DO11T細胞形成的肽特異性反應也顯著降低，但與70M7-KC處理的細胞相比，差別有顯著性(PB)。重組70m7-KC處理的淋巴結細胞經35M固醇處理后，其增殖無顯著變化(p值>0.5)。b)。35μm固醇可明顯重建35M和17.5M7-KC處理細胞的細胞膜次序(分別為未加固醇細胞的3倍和1.2倍)(p值b)。
圖2
CD4抗體特異性增殖反應+有有序和無序膜的T細胞。用不同含量的7-KC-MβCD復合物和(或)不同含量的固醇-MβCD復合物和MβCD載體對照處理淋巴結細胞10min。剌激肽c-ova的增殖反應323–339或控制肽c-–33448歲后接受檢測(A)和72(B)37℃孵化器孵育小時。在細胞培養中加入20倍量的MTT試劑，并在總孵育時間的最后4h內進行孵育。每種培養物的光密度都挺好，反映了抗體特異性CD4。+T細胞增殖反應，在490nm處用96孔板閱讀器讀取。所有數據從5個獨立試驗中估算。錯誤條表示標準錯誤。用JMP程序進行單向殘差剖析和TUKEY后剖析，估算各組間的統計學意義。不同聯接字母組間差別有顯著性(p
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綜上所述，我們的數據表明，尿酸顯著地重建了由7-KC造成的膜衰弱，并呈劑量依賴性。重要的是，323–在7-KC診治中的特異性增殖反應+T細胞經尿酸膜次序恢復后顯著重建。
討論
T淋巴細胞抒發抗體受體，與其膜結合卟啉聯接后啟動訊號傳導.初期的時空訊號風波發生在質膜的脂類環境中。模型膜的實驗證明了磷脂的自組織行為為液體有序(L)。o)和無序(Ld)飽和脂類和血脂生成有序的階段。相反，不飽和磷脂推動衰弱。d相)在這種模型膜中,,,,,,。真核細胞質膜中有序和無序相的存在是有爭議的，其對細胞反應生理學的貢獻尚不清楚。據悉，有序區域的組成異質性,，尿酸與蛋白質在微團簇中的聯系挑戰了含有固醇有序結構域的細胞訊號傳導作用。,。許多關于有序膜結構域在細胞訊號傳遞中的作用的證據都是使用當插入細胞膜時會形成衰弱的化合物而出現的。,,,,,。增加細胞尿酸的生物物理或遺傳學方式早已形成了經驗證據來支持膜序在細胞訊號傳遞中的作用。,,。但是，在膜衰弱細胞重建其膜序后，細胞訊號的恢復缺少直接的證據。我們的數據表明，尿酸可以通過抗體受體恢復其細胞訊號。這種實驗證明了尿酸依賴的膜序(L)的關鍵作用。o)CD4抗體特異性克隆擴增。+T細胞
膜有序是由各類組成的異質膜結構域貢獻的，這種結構域含有或不含甘油三酯。而廣泛研究的含有飽和醇類、膽固醇和糖類錨定蛋白的脂筏(Lrs)是報導的有序膜結構域。,,,在質膜上也存在無尿酸的含有鞘脂的有序結構域，對膜的有序性也有貢獻。。這種有序結構域在大小(10-100nm)和蛋白質組成上是不均勻的。,,,,。通過消除尿酸或將氧化方式的固醇插入膜中，導致膜衰弱，進而抑制CD4。+T細胞反應，因而被覺得是基于lrs/lr的脂類有序結構域和其他有序膜結構域在T細胞訊號和激活中的作用的實驗證據。,,,,,。通過在無序膜中插入尿酸來恢復膜的有序結構域會形成含有固醇的有序結構域。那些可能是依賴尿酸的LRs，而不是無尿酸的含有鞘脂的有序結構域。LRs是T細胞中的一個子集，還是包含所有尿酸濃度高的有序膜結構域尚不清楚。組成非均質膜結構域之間的完整關系須要進一步的研究。
在質膜的脂類微環境中，由抗體受體(TCR)αβ(抗體受體)感知外源抗體，并由其相關的CD3氨基酸啟動的質膜訊號級聯發生。T細胞膜流動性對內稟次序(L)的影響o)和衰弱(Ld)初期訊號風波仍不清楚。尿酸和飽和脂筏在訊號分子分隔和促使細胞訊號傳遞中的作用仍然被提出。,,,。已知脂筏和納米結構域有助于細胞訊號的時空調控。脂筏在抗體感知過程中結合在一起，并在免疫突觸中富集。,,。CD4之間的互相作用+T細胞與抗體提呈細胞，以不依賴抗體的形式，推動脂筏結構域的結合。。T細胞固醇靶點基因水平的改變對其生物合成或調節細胞固醇水平(內流或流出)改變反應至關重要。。已知細胞膜和細胞器中尿酸水平的改變對觀察到的細胞行為有貢獻。。膜脂次序對細胞反應性的直接貢獻尚不清楚。Di-螢光顏料在質膜外小葉的有限作用及其生物化學性質在固醇分子極性頭群間的錨定作用讓我們評估膜的流動性。一項已發表的報導顯示細胞膜抗原，在細胞膜上加入di-后，細胞內沒有大規模的內吞現象(改善)。相反，Hela細胞顯示出一些顏料內化的證據。。為了在我們的原始淋巴樣細胞實驗中直接評估這一問題，我們在環境濕度下用Di-4-染色后，在共聚焦顯微鏡下對細胞進行了觀察，并與4°C染色的細胞進行了比較。。其實我們不能排除顏料的個別內化，但在質膜上觀察到大量染色(圖2s)。這種性質的顏料，以尋問膜流動性在靜止的中級淋巴樣細胞，使我們可以直接評估抗體特異性T細胞訊號作用，尿酸依賴的膜序在質膜內。本報告顏料的特點報導了膜次序的生化重建，結合抗體特異性T細胞反應性的恢復，證明了尿酸在組織/推動膜L中的重要性。o以及細胞反應。
膜衰弱怎么破壞抗體傳感器和/或受體訊號的機制尚不清楚。將Src激酶及其底物集聚在一起的脂筏集聚及其在參與TCR觸發的下游訊號風波中的作用就是這樣一種可能性。近來的研究顯示CD4細胞間互相作用的RAFT結合作用。+T細胞和抗體提呈細胞，以不依賴抗體的形式據推斷，這些細胞間的互相作用可能為正式發生的訊號風波和T細胞活化做好膜打算。。免疫突觸是坐落互相作用的T細胞和抗體提呈細胞接觸部位的初期T細胞活化風波的一個位點，它被濃縮成有序結構域的一部份。。中級CD4的初期激活風波+T細胞，通過p56的活化來評判萊克和LAT蛋白，不受膜序破壞的影響。,。但是，已發表的報導顯示脂筏完整性對鈣通量和AKT活化反應可能有影響。。這種觀察表明，在原代T細胞中，通過抗體受體的訊號發生在膜筏外，其在細胞訊號傳遞中的作用僅在細胞膜近端訊號風波的后期或下游出現。與此相一致的是已發表的報告。。據悉，超區分顯微鏡顯示抗體受體在天真T細胞質膜上的隨機分布。。這種單聚抗體受體通過聯接脂筏外的肽-mhc復合物而觸發訊號。,。其實這種數據暗示了一些訊號的時空調控，但其他的報導顯示尿酸分子與抗體受體的β鏈有特定的結合，這些互相作用在T細胞的激活和反應中起著重要的作用。,。未來的研究須要檢測與抗體受體相關的固醇作用的相對貢獻，以及與膜次序有關的固醇。